[發明專利]一種鵝星狀病毒實時熒光定量PCR檢測的引物和探針

有效

• 申請號: 201710711791.2
• 申請日: 2017-08-18
• 公開（公告）號: CN107299155B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 萬春和;陳翠騰;黃瑜;程龍飛;傅光華;施少華;陳紅梅;傅秋玲;劉榮昌
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明涉及一種鵝星狀病毒實時熒光定量PCR檢測的引物和探針，屬于動物傳染病學領域。本發明包括特異性引物和探針序列的設計、標準質粒的構建、實時熒光定量PCR擴增方法的建立和優化，樣本DNA提取及結果檢測判定。本發明建立的檢測鵝星狀病毒的實時熒光定量PCR的引物和探針的方法，在檢測鵝星狀病毒上靈敏度高、穩定性好、特異性強、重復性好，最低可檢測15.7個拷貝，可用于檢測臨床樣本中鵝星狀病毒的感染檢測。

技術領域

本發明涉及一種鵝星狀病毒實時熒光定量PCR檢測的引物和探針，屬于動物傳染病學領域。

背景技術

星狀病毒屬于星狀病毒科(astroviridae)星狀病毒屬(astrovirus)，根據宿主不同分為兩個屬：哺乳動物星狀病毒屬(Mamastrovirus)和禽類星狀病毒屬(Avastrovirus)。禽星狀病毒屬現有3個屬（Avastrovirus 1-3），包括鴨星狀病毒(Duck astrovirus)、鳥腎炎病毒(Avian nephritisa strovirus)、火雞星狀病毒(Turkey astrovirus)等，火雞星狀病毒其代表種。星狀病毒是單股正鏈、無囊膜的小RNA病毒，其基因組長度大約6.8kb，，從5′端至3′端共包含4部分：1個85個核苷酸的5′端非編碼區、3個開放閱讀框(Open readingframes, ORFs)（ORF1a、ORF1b、ORF2）、1個80個核苷酸的3′端非編碼區、1個30個核苷酸的多聚腺苷酸尾巴。

鴨星狀病毒是鴨病毒性肝炎（DHV）的主要致病原之一，DHV是危害養鴨業的重要傳染病因其可導致雛鴨出現高死亡率，其發生常給養鴨業造成重大經濟損失。DHV分為鴨甲肝病毒（DHAV）、鴨星狀病毒1 型（DAst V-1）、鴨星狀病毒 2 型（DAst V-2）三個血清型，三個血清型之間均沒有明顯的抗原交叉保護。1965年，在英國的Norfolk 首次報道發現 DHV-II（即現在所說的 DAst V-1）以來，DAst V-1在各國均未被報道，因此DAst V-1被認為僅限于在英國流行。2008 年，Fu等報道在我國發現DAstV-1，并完成了第一株DAstV-1中國分離株（C-NGB）的全基因組測序。2014 年劉寧等中國南部發現了DAst V-2。

近年來，隨著檢測技術的不斷優化和檢測領域的擴展，從人和動物中獲得的新的星狀病毒毒株序列與已知的星狀病毒毒株序列的進化距離較遠，可能還會有更多新亞型和基因型。2017年，本團隊在福建某鵝養殖場送檢的病料中，檢測到鵝群中存在星狀病毒感染（命名為鵝星狀病毒GsFJ2017株，GenBank登錄號為MF576430），該片段和禽星狀病毒代表株（火雞星狀病毒2型）的核苷酸同源性為69.1%，和赤頸鴨（Anas penelope）星狀病毒的核苷酸同源性僅為60.6%。