[發明專利]一種血細胞染色方法

在審

• 申請號: 201710707782.6
• 申請日: 2017-08-17
• 公開（公告）號: CN107505181A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 孫真真;朱冰柯;李丹丹
• 申請（專利權）人: 河南科技大學第一附屬醫院
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)61223
• 代理人: 李振瑞

技術領域

本發明屬于血細胞染色技術領域，具體涉及一種血細胞染色方法。

背景技術

觀察血細胞形態是醫學檢驗過程中的基本手段，如果不對細胞進行染色處理，顯微鏡下觀察到的所有細胞形態相似，難以區分血細胞。因此醫學檢驗過程中常常使用瑞氏染色法、姬姆薩染色法、巴氏染色法或者蘇木素-伊紅染色法進行血細胞的臨床染色檢驗。

瑞氏染色法是目前最常用且最簡單的染色方法。瑞氏試劑中的酸性伊紅和堿性美藍混合而成的中性染料，久置后生成天青，可以對細胞核及細胞漿著色。瑞氏染色法的染色原理既有物理吸附作用，又有化學親和作用。由于不同細胞成分化學性質不同，對各種染料的親和力也不一樣。比如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，能夠與酸性染料伊紅結合，被染成粉紅色；細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞胞質為酸性，能夠與堿性染料美藍或天青結合，被染成紫藍色或藍色。

現有技術中，瑞氏染色法常用磷酸二氫鉀-磷酸氫二鈉緩沖液作為染液稀釋液，但是該緩沖液稀釋后染色效果不穩定，容易出現染色不清晰或者染色較淺的缺陷。

發明內容

本發明提供的一種血細胞染色方法，解決了磷酸二氫鉀-磷酸氫二鈉緩沖液作為稀釋液導致的染色效果不穩定，容易出現染色不清晰或者染色較淺的問題。

本發明提供的一種血細胞染色方法，包括以下步驟：

S1，制備染色液

所述染色液由瑞氏色素、甲醇和甘油混合后放置于室溫3d，備用，放置期間振搖以促進瑞氏色素的溶解，其中瑞氏色素：甲醇：甘油的比例為1g:60ml:1～2ml；

S2，制備染色緩沖液

每升染色緩沖液由以下組分混合后制成：磷酸二氫鉀0.3g，磷酸氫二鈉0.2g，甘油5～10ml，質量分數30％的雙氧水5～10μL，蒸餾水定容至1L；

S3，染色

利用S2的染色緩沖液對S1的染色液進行稀釋，稀釋混勻后靜置5～10min，混勻，得到稀釋染色液，將稀釋染色液直接滴加到預先制備好的血膜上，并覆蓋整個血膜，3～5min后流水沖洗血膜，干燥，完成對血細胞的快速染色，用顯微鏡觀察染色結果即可。

優選的，上述血細胞染色方法，所述血膜按照以下方法制備而成：

S31，將抗凝血滴加在載玻片上，推動推片使血液在載玻片上展開，制成具有血片的血涂片；

S32，血涂片的血片晾干后在血片上滴加并覆蓋磷酸鹽緩沖液，5min后流水沖洗，晾干得到具有血膜的血涂片；其中每升磷酸鹽緩沖液由以下組分混合后制成：磷酸二氫鉀0.3g，磷酸氫二鈉0.2g，蒸餾水定容至1L。

優選的，上述血細胞染色方法，將1滴抗凝血滴加到載玻片上，將推片與載玻片呈30～45度角，平推推片使血液沿推片邊緣在載玻片上展開，制成具有血片的血涂片。

優選的，上述血細胞染色方法，S31中，將2滴抗凝血滴加到載玻片上，用推片的一角接觸到血滴上，旋轉推片并逐漸降低推片與載玻片所呈的角度，使血滴變為直徑0.75～0.85cm的血片，制成具有血片的血涂片。

優選的，上述血細胞染色方法，S2中，每升染色緩沖液由以下組分混合后制成：磷酸二氫鉀0.3g，磷酸氫二鈉0.2g，甘油5ml，質量分數30％的雙氧水5μL，蒸餾水定容至1L。

與現有技術相比，本發明提供的一種血細胞染色方法具有以下有益效果：

(1)本發明的方法對瑞氏染色法使用的染色緩沖液進行改進，在傳統緩沖液的基礎上加入了雙氧水，利用雙氧水的氧化作用，促進天青的生成，從而使配制好的染色緩沖液與染色液混合后，只需要放置5～10min即可使用，不影響染色效果，且染色液配制好后只需要放置3d即可與染色緩沖液配合使用，耗時短。

(2)我們還對血膜的制備方法進行了改進，在制備具有血膜的血涂片時，滴加磷酸鹽緩沖液，發現實施例1制備的染色液、染色緩沖液和血膜只需要5min即可完成染色，且染色效果良好，滴加磷酸鹽緩沖液有利于縮短染色時間，節約時間成本。

(3)制備染色液和染色緩沖液時，添加甘油，防止甲醇和雙氧水的揮發，增加二者的儲藏時間。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明，但不應理解為本發明的限制。下列實施例中未注明具體條件的試驗方法，通常按照常規條件操作，由于不涉及發明點，故不對其步驟進行詳細描述。

實施例1

一種血細胞染色方法，包括以下步驟：

S1，制備染色液