[發明專利]一種毛細管電泳分離小麥醇溶蛋白的方法

有效

• 申請號: 201710702485.2
• 申請日: 2017-08-16
• 公開（公告）號: CN107505379B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 張晉丹;馮旻
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王春霞

1.一種毛細管電泳分離小麥醇溶蛋白的方法，包括如下步驟：

以陽離子型聚乙烯吡咯烷酮作為材料，在毛細管的管壁上制備涂層；采用毛細管電泳分離小麥樣品，即實現小麥醇溶蛋白的分離；

所述陽離子型聚乙烯吡咯烷酮為二甲基二烯丙基氯化銨和乙烯吡咯烷酮的共聚物，其粘均分子量為20000~25000；

按照下述步驟制備所述涂層：

依次采用所述陽離子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液和運行緩沖液A沖洗所述毛細管；

所述陽離子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液沖洗后包括靜置的步驟；

所述陽離子型聚乙烯吡咯烷酮的水溶液的質量百分比濃度為0.1~0.5%；

所述運行緩沖液A為pH為6.5的磷酸鹽緩沖液與乙腈的混合液；

所述毛細管電泳分離的條件如下：

電壓為12~18kv；

運行緩沖液B為pH為6.5的磷酸鹽緩沖液與乙腈的混合液；

所述磷酸鹽緩沖液的濃度為10mM~20mM；

所述磷酸鹽緩沖液與所述乙腈的體積比為4：1；

時間為25~40分鐘；

所述小麥樣品經如下預處理：小麥種子粉碎、烘干并過篩后，進行如下提取步驟：

1）采用氯化鈉水溶液進行提取，離心后取上清液A；

2）采用氯化鈉水溶液提取所述上清液A，離心后取沉淀；

3）采用乙醇水溶液提取所述沉淀，離心后取上清液B用于所述毛細管電泳分離；

所述氯化鈉水溶液的濃度為0.1~0.2M；

所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為70~75%。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1）中，所述提取的時間為15~60分鐘；

步驟2）中，所述提取的時間為15~60分鐘；

步驟3）中，所述提取的時間為3~4小時。