[發(fā)明專利]擴(kuò)增核酸的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710702484.8
• 申請(qǐng)日: 2017-08-16
• 公開（公告）號(hào): CN107385065B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭金海;常爽爽;劉進(jìn)穩(wěn);曾沃坦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京東方亞美基因科技研究院有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12Q1/6886;C12N15/10
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.擴(kuò)增核酸的方法，其特征在于：所述方法包括用延伸引物對(duì)延伸反應(yīng)模板進(jìn)行引物延伸，得到延伸產(chǎn)物，所述延伸產(chǎn)物即為擴(kuò)增后的核酸；所述引物延伸由n個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)組成，所述n為5至25的一個(gè)自然數(shù)；所述n個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)均由兩個(gè)步驟組成，所述n個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟均是在反應(yīng)溫度為90℃-98℃、反應(yīng)時(shí)間為15-40秒的條件下進(jìn)行；所述n個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間均是遞增的，所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度的遞增速率是0.2℃-2℃/個(gè)循環(huán)，所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間的遞增速率是10-120秒/個(gè)循環(huán)；所述n個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度是T，反應(yīng)時(shí)間是1分鐘，所述T大于等于所述延伸引物的Tm值，所述T介于68℃-75℃之間。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟的反應(yīng)溫度為92℃-96℃；所述每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間為20-35秒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟的反應(yīng)溫度為93℃-95℃；所述每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間為25-35秒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟的反應(yīng)溫度為94℃；所述每個(gè)循環(huán)延伸反應(yīng)的第一個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間為30秒。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度的遞增速率為0.3℃/個(gè)循環(huán)-1.5℃/個(gè)循環(huán)，所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間的遞增速率為20秒/個(gè)循環(huán)-100秒/個(gè)循環(huán)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度的遞增速率為0.4℃/個(gè)循環(huán)-1.0℃/個(gè)循環(huán)，所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間的遞增速率為30秒/個(gè)循環(huán)-80秒/個(gè)循環(huán)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度的遞增速率為0.5℃/個(gè)循環(huán)-0.8℃/個(gè)循環(huán)，所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間的遞增速率為30秒/個(gè)循環(huán)-50秒/個(gè)循環(huán)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)溫度的遞增速率為0.5℃/個(gè)循環(huán)，所述第二個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間的遞增速率為30秒/個(gè)循環(huán)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述延伸反應(yīng)模板為DNA或RNA。

10.制備PCR模板的方法，包括按照權(quán)利要求1-9中任一所述的方法用延伸引物對(duì)延伸反應(yīng)模板進(jìn)行引物延伸，得到延伸產(chǎn)物，該延伸產(chǎn)物即為PCR模板。

11.聚合酶鏈反應(yīng)方法，包括以下步驟：

a1)按照權(quán)利要求10所述的方法制備PCR模板；

a2)用PCR引物對(duì)所述PCR模板進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)。

12.權(quán)利要求1-9中任一所述的擴(kuò)增核酸的方法在進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)中應(yīng)用。

13.權(quán)利要求1-9中任一所述的擴(kuò)增核酸的方法在單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)中的應(yīng)用。

14.權(quán)利要求1-9中任一所述的擴(kuò)增核酸的方法在基因突變檢測(cè)中的應(yīng)用。