[發明專利]一種調控熱帶假絲酵母的長鏈二元酸轉運的基因及其應用

有效

• 申請號: 201710700549.5
• 申請日: 2017-08-16
• 公開（公告）號: CN107488670B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 汪俊卿;修翔;王瑞明;蘇靜;楊曉慧;彭健;薛樂
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C07K14/40;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/64
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

一種調控熱帶假絲酵母的長鏈二元酸轉運的基因及其應用。所述熱帶假絲酵母的長鏈二元酸轉運的基因ctlpA，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述長鏈脂肪酸轉運蛋白CtLpA，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明首次發現熱帶假絲酵母中的長鏈二元酸轉運蛋白基因ctlpA為長鏈二元酸的跨膜轉運過程中的關鍵基因，其表達可以促進長鏈二元酸由胞內到胞外的跨膜轉運，為以油脂為原料實現新途徑合成長鏈二元酸打下基礎。

技術領域

本發明涉及一種調控熱帶假絲酵母的長鏈二元酸轉運的基因及其應用，屬于基因工程技術領域。

背景技術

長鏈二元酸一般是指碳鏈中含有12個以上碳原子的直鏈脂肪族二元羧酸。是一類重要原料，具有較高的工業應用價值，可用于合成特種尼龍、高級麝香、粘合劑、熱熔膠、醫藥、農藥等重要的化工中間體。長鏈二元酸不能從自然界直接獲取，目前國內外生產長鏈二元酸主要有2種方法：化學法和發酵法。與微生物發酵法相比，化學法生產長鏈二元酸條件苛刻、工藝復雜、不夠環保，且產品質量差，因此眾多研究者將目標轉向有廣闊發展前景、工業價值大的微生物發酵上來。微生物發酵法反應專一、反應條件溫和等優勢勢必成為綠色化合成長鏈二元酸中一個重要的研究開發領域。微生物發酵法所用的原料是正構烷烴，利用熱帶假絲酵母菌(Candida tropicalis)的氧化性能，在常溫常壓下氧化正構烷烴兩端的甲基，生成基質烷烴相應鏈長的二元酸。國內已經實現了以烷烴為底物發酵生產長碳鏈二元酸的產業化，生物法制備得到十一至十四碳二元酸已投放市場。如中國專利文獻CN1570124A(申請號2004100182557)、中國專利文獻CN1844404A(申請號CN200610038331X)、中國專利文獻CN101225411A(申請號2007101958427)、中國專利文獻CN102115769A(申請號2009102565907)、中國專利文獻CN102115768A(申請號2009102565890)、中國專利文獻CN102115766A(申請號2009102565871)、中國專利文獻CN102115765A(申請號2009102565867)、中國專利文獻CN102061316A(申請號2010101603101)和中國專利文獻CN103805642A(申請號2012104397995)等。

目前微生物發酵法生產長鏈二元酸的技術特別是微生物育種方面日趨成熟，如中國專利文獻CN105400796A(申請號201511003830)則公開了一種熱帶假絲酵母定位于過氧化物酶體膜上的長鏈脂肪酸轉運蛋白基因pxa1p，并通過基因工程阻斷該基因的合成實現長鏈二元酸產量的提升。中國專利文獻CN103992959A(申請號2014101755564)通過增加一個拷貝的CYP單加氧酶基因提高熱帶假絲酵母長鏈二元酸的產率，中國專利文獻CN102839133A(申請號CN201110168672X)則菌種誘變育種篩選到一株pox4基因、fao基因和CYP52A18基因的突變株，突變株對不同碳鏈長度的烷烴、脂肪酸等物質具有很高的轉化性能。

然而，對于開發具更高長鏈二元酸生產能力的菌株及生產方法，仍然是目前的研究熱點。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種調控熱帶假絲酵母的長鏈二元酸轉運的基因及其應用。

本發明技術方案如下：

一種調控熱帶假絲酵母的長鏈二元酸轉運的基因ctlpA，核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

調控熱帶假絲酵母的長鏈脂肪酸轉運的基因ctlpA來源于熱帶假絲酵母，定位于熱帶假絲酵母細胞膜上，其表達可以促進長鏈脂肪酸衍生物長鏈二元酸由胞內到胞外的跨膜轉運。

一種長鏈二元酸轉運蛋白CtLpA，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一種重組表達載體，該表達載體包含有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的長鏈二元酸轉運的基因ctlpA。