[發明專利]核酸文庫的動力學排除擴增

有效

• 申請號: 201710698877.6
• 申請日: 2013-06-12
• 公開（公告）號: CN107570092B
• 公開（公告）日: 2020-03-17
• 發明（設計）人: 敏-瑞·理查德·沈;喬納森·馬克·鮑特爾;凱瑟琳·M·斯蒂芬斯;M·羅納格希;凱文·L·岡德森;巴拉·穆拉利·文卡特桑;M·謝恩·鮑恩;坎達斯瓦彌·維加嚴
• 申請（專利權）人: 伊魯米那股份有限公司
• 主分類號: B01J19/00
• 分類號: B01J19/00;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 鄭霞

1.一種用于擴增核酸的方法，所述方法包括

(a)提供擴增反應物，所述擴增反應物包括

(i)擴增位點的陣列，及

(ii)包括多個不同的靶核酸的溶液，

其中在所述溶液中所述不同的靶核酸的數量超過在所述陣列中擴增位點的數量，

其中所述不同的靶核酸具有流體通路至多個擴增位點，且

其中每個所述擴增位點包括容納所述多個不同的靶核酸中的數個核酸的容量；及

(b)使所述擴增反應物反應以產生多個擴增位點，所述多個擴增位點各自包括來自所述溶液中的單個靶核酸的擴增子的克隆群，其中所述反應包括(i)從轉運到每個所述擴增位點的單個靶核酸產生第一擴增子，及(ii)從轉運到每個所述擴增位點的所述單個靶核酸或從所述第一擴增子產生后續的擴增子，其中在所述擴增位點產生所述后續的擴增子的平均速率超過在所述擴增位點產生所述第一擴增子的平均速率。

2.根據權利要求1所述的方法，其中每個所述擴增位點包括被用于在(b)中產生所述擴增子的多個引物。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一擴增子的所述產生包括將至少一個所述引物從非可延伸狀態轉化為可延伸狀態。

4.根據權利要求2所述方法，其中所述擴增位點的陣列包括在表面上的特征的陣列。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述特征是非連續的且被缺乏被用于在(b)中產生所述擴增子的所述引物的所述表面的間隙區域間隔。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述反應包括與(i)所述第一擴增子的所述產生，及(ii)所述后續的擴增子的所述產生同時地，將靶核酸從所述溶液轉運到所述擴增位點。

7.根據權利要求1所述的方法，其中在(i)所述第一擴增子的所述產生，及(ii)所述后續的擴增子的所述產生之前將所述靶核酸從所述溶液轉運到所述擴增位點。

8.根據權利要求1所述的方法，其中每個所述擴增位點包括能夠結合所述溶液中的所述不同的靶核酸的多個捕獲劑。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述擴增位點的陣列包括在表面上的特征的陣列。

10.根據權利要求9所述的方法，其中每個所述特征的面積大于被轉運至每個所述擴增位點的所述單個靶核酸的排除體積的平均直徑。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述特征是非連續的且被缺乏所述捕獲劑的所述表面的間隙區域間隔。

12.根據權利要求9所述的方法，其中每個所述特征包括珠、孔、通道、脊、突起、或其組合。

13.根據權利要求8所述的方法，其中所述捕獲劑包括與所述不同的靶核酸互補的捕獲核酸。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述不同的靶核酸包括與所述捕獲核酸互補的通用序列。

15.根據權利要求8所述的方法，其中所述捕獲劑包括與連接于所述不同的靶核酸的配體結合的受體。