[發(fā)明專利]一種合相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定電子煙煙液中降煙堿對(duì)映異構(gòu)體含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710698794.7
• 申請(qǐng)日: 2017-08-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107505411A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓書(shū)磊;陳歡;付亞寧;劉彤;侯宏衛(wèi);胡清源
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于理化分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種合相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定電子煙煙液中降煙堿對(duì)映異構(gòu)體含量的方法。

背景技術(shù)

電子煙，又名電子煙堿傳送系統(tǒng)，它能夠通過(guò)內(nèi)置霧化器將煙彈中的煙液霧化并將霧化氣輸送至口腔和肺部，而霧化氣中往往含有不同濃度水平的煙堿。出于成本考慮，電子煙煙液中添加的煙堿基本都是來(lái)源于煙草提取。除煙堿外，煙草中還含有其他次要生物堿，在煙草中含量較多、人們研究較多的生物堿主要有降煙堿、新煙草堿、假木賊堿、麥斯明等，這些次要生物堿也具有一定的生物活性，且是煙草及煙草制品中重要致癌物——煙草特有亞硝胺（TSNAs）的直接前體物質(zhì)。其中，降煙堿是電子煙煙液中的主要生物堿之一，降煙堿分子含有一個(gè)手性中心，所以降煙堿有兩個(gè)對(duì)映體：S-(-)-降煙堿（簡(jiǎn)稱S-降煙堿）和R-(+)-降煙堿（簡(jiǎn)稱R-降煙堿）。根據(jù)對(duì)映異構(gòu)體的特性，降煙堿的兩個(gè)對(duì)映對(duì)映體可能具有完全不同的代謝機(jī)理和生理特性。此外，測(cè)定電子煙煙液中降煙堿的對(duì)映異構(gòu)體含量是判定電子煙煙液職工煙堿來(lái)源的重要手段，例如，合成煙堿中S-降煙堿和R-降煙堿比例一般為1:1，而提取煙堿中的降煙堿對(duì)映異構(gòu)體含量應(yīng)和煙草一致。因此，有必要對(duì)電子煙煙液中降煙堿的對(duì)映異構(gòu)體含量進(jìn)行分析測(cè)定。

目前，文獻(xiàn)報(bào)道降煙堿對(duì)映異構(gòu)體的測(cè)定方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS，Beitr?ge Zur Tabakforschung. 2013;25(7):649-659. Chirality. 1999;11(1):82-84.）、多維氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（MDGC-MS，J. Chromatogr. B. 2008;865(1):13-17.）、毛細(xì)管電泳法（CE，Electrophoresis. 2009;30(2):349–356.）等，但是，GC-MS和MDGC-MS需要在前處理過(guò)程中進(jìn)行衍生化，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，CE僅使用保留時(shí)間進(jìn)行定性，定性能力相對(duì)較差，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。此外，現(xiàn)有文獻(xiàn)主要針對(duì)煙草基質(zhì)，尚無(wú)判定電子煙煙液中降煙堿對(duì)映異構(gòu)體含量的方法報(bào)道。因此，有必要開(kāi)發(fā)一種靈敏度高、精密度好、適合大批量準(zhǔn)確定量電子煙煙液中S-降煙堿和R-降煙堿的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的正是基于上述技術(shù)不足，建立了一種合相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定電子煙煙液中降煙堿對(duì)映異構(gòu)體含量的方法。本方法在前處理過(guò)程中不需要衍生化過(guò)程，實(shí)現(xiàn)了S-降煙堿和R-降煙堿的基線分離，并使用二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行定性和定量，避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，所以，本方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、準(zhǔn)確定好等優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

將電子煙煙液樣品經(jīng)過(guò)氫氧化鈉溶液浸潤(rùn)后，采用二氯甲烷萃取，萃取液經(jīng)基質(zhì)分散固相萃取凈化后，使用串聯(lián)手性柱-合相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析，采用峰面積歸一化法定量檢測(cè)電子煙煙液中S-降煙堿和R-降煙堿的比例。

具體步驟如下：

1. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取約100.0 mg的S-降煙堿標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為2.0 mg/mL的S-降煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；稱取約100.0 mg的R-降煙堿標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為2.0 mg/mL的R-降煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；利用S-降煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和R-降煙堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋配制S-降煙堿和R-降煙堿濃度分別為100 μg/mL和100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. 電子煙煙液樣品的萃取

選擇正己烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷五種溶劑進(jìn)行萃取效率的比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二氯甲烷對(duì)降煙堿的萃取效率最高，甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和三氯甲烷次之，正己烷的萃取效率最差，故選擇二氯甲烷為最終的萃取溶劑。

優(yōu)化的萃取步驟為：

稱取0.3 g樣品于15 mL具塞離心管中，加入2.0 mL 5%的氫氧化鈉溶液（質(zhì)量比），渦旋1 min混勻后靜置10 min浸潤(rùn)樣品，取10 mL二氯甲烷到離心管中，并于旋渦混合器上以4000 rpm速度振蕩30 min。

4. 萃取液的凈化

取1.5 mL上清液于2 mL凈化離心管中（內(nèi)含150 mg無(wú)水硫酸鎂，50mg PSA吸附劑，25 mg GCB吸附劑，統(tǒng)稱基質(zhì)分散固相萃取材料），于旋渦混合器上以4000 rpm振蕩2 min，以10000 rpm離心1 min。取上清液過(guò)0.45 μm有機(jī)相濾膜后進(jìn)液相分析。

5. 串聯(lián)手性柱-合相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法條件