[發(fā)明專利]一種生物分子檢測試劑、制備方法、檢測設備及應用

在審

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• 申請日: 2017-08-15
• 公開（公告）號: CN107367497A
• 公開（公告）日: 2017-11-21
• 發(fā)明（設計）人: 張瑩;張偉;王柳丁
• 申請（專利權）人: 華中農業(yè)大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司11385
• 代理人: 董芙蓉

技術領域

本發(fā)明涉及生物分子檢測領域，尤其涉及一種生物分子檢測試劑、制備方法、檢測設備及應用。

背景技術

目前，體液(血液、尿液、精液等)中與某些疾病相關的生物標志物(如循環(huán)腫瘤細胞、游離態(tài)的miRNA等)已被認為能夠用于該疾病的早期檢測。針對上述生物標志物的檢測，分子信標檢測技術具有背景信號低,靈敏度高、特異識別性強、操作簡單，不必與未反應探針分離即可實時檢測，可用于活體分析等優(yōu)點，已逐漸被用于疾病的早期檢測。

分子信標(Molecular Beacon)是一種短的寡核苷酸單鏈構成的莖環(huán)結構。通常，寡核苷酸鏈一端為熒光基團標記，另一端為淬滅基團標記。由于兩端的核苷酸序列互補，其熒光基團和淬滅基團相互靠近發(fā)生能量共振轉移，被激發(fā)后熒光基團產生的光子被淬滅基團淬滅。如果被檢測的靶標分子能夠與分子信標的單鏈環(huán)區(qū)域雜交，就能使莖環(huán)結構遭到破壞，熒光基團與淬滅基團之間的空間距離得以增大，就不能產生熒光能量共振轉移，就能夠檢測被激發(fā)后熒光基團產生的熒光信號。

但是，通常使用的分子信標淬滅基團價格較為昂貴，并且其檢測結果需要依賴熒光光譜儀等貴重的大型儀器進行表征，這在一定程度上限制了其應用。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明實施例提供了一種生物分子檢測試劑、制備方法、檢測設備及應用，主要目的是降低開發(fā)成本。

為達到上述目的，本發(fā)明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發(fā)明實施例提供了一種生物分子檢測試劑的制備方法，所述方法包括以下步驟：

將含碳酸鈣的天然生物質加入磷酸鹽溶液中，在溫度為160℃-300℃，壓力為10MPa-30MPa條件下，反應3-10天后得到反應產物；

根據待檢測目標分子的核苷酸序列設計嵌合分子信標，使所述分子信標的環(huán)區(qū)域的核苷酸序列與所述待檢測目標分子特異性識別，在所述分子信標的莖結構兩個末端分別標記熒光發(fā)射基團和氨基后，再配制核酸分子信標溶液；

將所述分子信標溶液滴加至所述改性產物的表面，在溫度為25℃-30℃的條件下避光孵育過夜，再用磷酸緩沖鹽溶液沖洗所述反性產物，得到所述檢測試劑。

作為優(yōu)選，所述含碳酸鈣的天然生物質為雞蛋殼、海螺殼、貝殼或珊瑚。

作為優(yōu)選，所述磷酸鹽溶液的質量百分比為1.4％。

作為優(yōu)選，所述反應產物合成時的反應溫度為160℃-200℃，反應壓力為10MPa-30MPa，反應時間為5-7天。

作為優(yōu)選，所述分子信標的核苷酸序列是采用DNA合成儀合成；所述分子信標溶液的濃度為1μM-100μM。

另一方面，本發(fā)明實施例提供了一種生物分子檢測試劑，所述檢測試劑是由上述方法制備得到。

再一方面，本發(fā)明實施例提供了上述生物分子檢測試劑在疾病早期檢測中的應用。

又一方面，本發(fā)明實施例提供了一種生物分子檢測設備，所述檢測設備包括盒體、紫外光照射設備及滴管；

所述盒體依次設置樣品室，用于滴加待檢測液體；

濾膜，用于過濾所述待檢測液體中雜質；

測試區(qū)，用于顯示檢測結果，所述測試區(qū)內設置有權利要求1-6任一項所述的檢測試劑；

參考區(qū)，用于對照檢測結果，所述參考區(qū)內設置有權利要求1-6任一項所述的檢測試劑；

檢測時，用滴管將所述待檢測液體滴人所述樣品室內，所述待檢測液體經所述濾膜過濾后進入所述測試區(qū)，待所述測試區(qū)鋪滿所述待檢測液體后，至少放置15分鐘后，用所述紫外光照射設備照射所述測試區(qū)和所述參考區(qū)，比較兩者顯示出的熒光信號的差異，若無差異，則所述待檢測液體中無目標分子存在，若有差異，則所述待檢測體液中存在所述目標分子。

作為優(yōu)選，所述盒體的材質為聚氯乙烯；所述濾膜的材質為以聚丙烯為支撐的玻璃纖維膜，所述滴管的材質為聚丙烯。

作為優(yōu)選，所述紫外光照射設備為小型驗鈔儀。

本發(fā)明中，利用含碳酸鈣的天然生物質與磷酸鹽反應得到的改性產物為改性后的羥基磷灰石(HAp)。