[發(fā)明專利]花生根瘤菌培養(yǎng)基以及采用其制備花生液體根瘤菌劑的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710697519.3
• 申請(qǐng)日: 2017-08-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107245469A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊國(guó)平;姜亞軍;司海麗;曹寶玲;宋少華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島普利普生態(tài)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/41
• 代理公司: 東莞市華南專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44215
• 代理人: 王雪镅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及花生根瘤菌劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及花生根瘤菌培養(yǎng)基以及采用其制備花生液體根瘤菌劑的方法。

背景技術(shù)

中國(guó)耕地面積占全世界耕地面積的7%，而氮肥用量卻占全球總用量的25%，是世界平均用量的3.75倍。生產(chǎn)化工合成氮肥將消耗大量的、不可再生的石化原料，如天然氣、石油和煤炭等。隨著自然能源有限儲(chǔ)量的不斷減少，石油天然氣的價(jià)格將持續(xù)攀升，從而不可避免地拉動(dòng)化肥價(jià)格上漲。化肥工業(yè)還是造成環(huán)境污染，產(chǎn)生溫室氣體的重要源頭。化肥在施入田間后會(huì)造成土壤板結(jié)，降低土地生產(chǎn)潛力。植物對(duì)化肥的吸收利用率只有30%，這意味著有70%的氮肥不僅沒(méi)有滋養(yǎng)作物，而且進(jìn)入地下水源和空氣中，造成飲用水和空氣質(zhì)量下降，進(jìn)而危害我們的身體健康。

事實(shí)上花生生長(zhǎng)所需的氮素營(yíng)養(yǎng)基本上由根瘤菌提供，如果沒(méi)有根瘤菌的存在，每畝要施一百多公斤尿素才能滿足畝產(chǎn)200公斤花生的氮肥需求。

每畝按400公斤花生，400公斤秸稈來(lái)計(jì)算：

花生蛋白質(zhì)含量平均為25%；秸稈含蛋白質(zhì)10%

400 x 25% + 400 x 10%= 140 公斤蛋白質(zhì)

140公斤蛋白質(zhì)折合純氮

140/ 6.25 = 22.4公斤純氮

22.4 公斤純氮等于48.7公斤尿素，

考慮到尿素的植物吸收利用率為30%左右，48.7÷30%=162.3，這意味著如果沒(méi)有花生根瘤菌提供的氮素營(yíng)養(yǎng)，每畝要施162公斤尿素才能生產(chǎn)400公斤花生。所以說(shuō)花生的氮肥基本上是根瘤菌貢獻(xiàn)的。由此可見(jiàn)，根瘤菌的好與壞對(duì)花生的生產(chǎn)至關(guān)重要。

根瘤菌接種技術(shù)之所以在我國(guó)未能廣泛采用，除了科學(xué)知識(shí)普及不夠，農(nóng)民對(duì)根瘤菌的作用不甚了解外，最主要原因是根瘤菌產(chǎn)品質(zhì)量不過(guò)關(guān)，保質(zhì)期短。根瘤菌劑的有效成份是活的根瘤菌，但如果制劑不過(guò)關(guān)，當(dāng)產(chǎn)品經(jīng)過(guò)一個(gè)長(zhǎng)的供應(yīng)鏈到達(dá)農(nóng)民手中時(shí)往往只有少量活性根瘤菌，實(shí)際應(yīng)用效果不明顯。

目前，采用文獻(xiàn)公開(kāi)報(bào)道的培養(yǎng)基和常規(guī)發(fā)酵工藝（主要是用于芽孢桿菌發(fā)酵）的方法生產(chǎn)花生液體根瘤菌劑，存在著營(yíng)養(yǎng)不平衡、菌體活性低的弊端，而且，目前培養(yǎng)花生根瘤菌的培養(yǎng)基碳源單一，雖然大多數(shù)培養(yǎng)基能很好地支持根瘤菌生長(zhǎng)，菌數(shù)可達(dá)30-80億/毫升，但它們基本上都難以在室溫下穩(wěn)定存活，其常溫放置2個(gè)月的活菌數(shù)僅為1~10%。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供花生根瘤菌培養(yǎng)基，該花生根瘤菌培養(yǎng)基的碳源豐富，能夠在室溫下穩(wěn)定存活。

本發(fā)明的目的之二在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種采用花生根瘤菌培養(yǎng)基制備花生液體根瘤菌劑的方法，該方法制得的花生液體根瘤菌劑具有營(yíng)養(yǎng)平衡、菌體活性高的優(yōu)點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的之一，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

提供花生根瘤菌培養(yǎng)基，是海藻糖、甘露醇、蔗糖、檸檬酸、酵母粉、賴氨酸、組氨酸、尿素、KH₂PO₄、MgSO₄?7H₂O、CaCl₂?2H₂O、FeSO₄?7H₂O、NaCl、Na₂MoO₄·2H₂O和生物素配制而成的水溶液；其中，海藻糖濃度為1~3克/升、甘露醇濃度為1~3克/升、蔗糖濃度為1~3克/升、檸檬酸濃度為1~3克/升、酵母粉濃度為2.5~4.5克/升、賴氨酸濃度為0.13~0.25克/升、組氨酸濃度為0.1~0.2克/升、尿素濃度為1~3克/升、KH₂PO₄濃度為0.2~0.5克/升、MgSO₄?7H₂O濃度為0.1~0.3克/升、CaCl₂?2H₂O濃度為0.1~0.2克/升、FeSO₄?7H₂O濃度為0.05~0.11克/升、NaCl濃度為0.05~0.15克/升、Na₂MoO₄·2H₂O濃度為0.01~0.03克/升、生物素濃度為0.0005~0.002克/升，所述的水溶液pH為6.8~7.5；并在上述組份灌裝前添加聚乙烯吡咯烷酮PVP90，所述聚乙烯吡咯烷酮PVP90的濃度為1~30克/升。