[發明專利]一種用于檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性的組合物及其應用

有效

• 申請號: 201710697469.9
• 申請日: 2017-08-15
• 公開（公告）號: CN107541548B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 劉沛;王林海
• 申請（專利權）人: 北京鑫諾美迪基因檢測技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏;楊敬

本發明公開了一種用于檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性的組合物及其應用，通過FAM、HEX、ROX(修飾)三通道多重PCR反應對SLCO1B1和ApoE基因中的單核苷酸多態性位點進行檢測。為了提高檢測的簡便性和特異性，通過探針分型的技術手段實現一管分型檢測，使得整個操作以及反應過程簡單化，并在此基礎上，對探針進行鎖核酸修飾和二級結構修飾，增加探針的Tm值，進一步提高探針結合的特異性的，最后通過調整引物對的配比、Taq酶的用量、鎂離子的用量等，提高整個試劑盒的最低檢測限、準確性和特異性，試劑盒最低檢測濃度能夠達到1ng/μL，準確性和特異性均能夠達到100％。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，具體涉及一種用于檢測SLCO1B1和ApoE基因多態性的技術。

背景技術

他汀類藥物(statins)是羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，此類藥物通過競爭性抑制內源性膽固醇合成限速酶(HMG-CoA)還原酶，阻斷細胞內羥甲戊酸代謝途徑，使細胞內膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細胞膜表面(主要為肝細胞)低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)受體數量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。他汀類藥物還可抑制肝臟合成載脂蛋白B-100，從而減少富含甘油三酯AV、脂蛋白的合成和分泌。

他汀類藥物分為天然化合物(如洛伐他丁、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀)和完全人工合成化合物(如氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、羅伐他汀、pitavastatin)是最為經典和有效的降脂藥物，廣泛應用于高脂血癥的治療。

他汀類藥物除具有調節血脂作用外，在急性冠狀動脈綜合征患者中早期應用能夠抑制血管內皮的炎癥反應，穩定粥樣斑塊，改善血管內皮功能。延緩動脈粥樣硬化(AS)程度、抗炎、保護神經和抗血栓等作用。

中國人群的血脂水平逐年升高，血脂異常的患病率明顯增加。預計到2030年我國心血管病事件增加至920萬。以低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)或成人血清總膽固醇(TC)升高為特點的血脂異常是動脈粥樣硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovasculardisease,ASCVD)重要的危險因素。有效的控制血脂異常，對我國ASCVD防控具有重要意義。

他汀類藥物自問世以來在人類ASCVD防治史上具有里程碑式的意義。其能夠抑制膽固醇合成限速酶HMG-CoA還原酶，減少膽固醇合成，繼而上調細胞表面LDL受體，加速血清LDL分解代謝。此外，還可抑制VLDL合成。因此他汀類藥物能顯著降低血清TC、LDL-C和ApoB水平，也能降低血清TG水平和輕度升高HDL-C水平。

2016《中國成人血脂異常防治指南》給出了中國人群不同種類他汀類藥物降膽固醇強度。多數人對他汀的耐受性良好，但部分患者SLCO1B1基因發生相關位點突變，則有可能表現出肌肉及肝功能異常等不良反應，這部分患者則無法接受大劑量他汀治療。

此外，該指南指出，他汀與其它降脂藥聯合應用，可改善使用中等強度他汀治療但膽固醇水平不達標或不耐受者的血脂情況。比如對于中等強度他汀治療效果不佳的患者，可考慮中/低強度他汀與依折麥布聯合治療(I類推薦，B級證據)。通常接受他汀治療效果不佳的患者，較大程度存在攜帶有ApoE 4等位基因。他汀通過增加LDL受體數量增強達到降低血脂水平，而攜有ApoE 4等位基因的載脂蛋白E與LDL受體親和力增加，導致反饋抑制LDL受體的表達，從而影響他汀藥物的藥效。

2010年伯克利心臟實驗室發布Clinical Implications Reference Manual，給出了針對ApoE 4基因型患者的用藥建議：大部分他汀類藥物對于ApoE 4型患者治療效果欠佳，可選用普羅布考或辛伐他汀。