[發明專利]人胚胎干細胞的分化

有效

• 申請號: 201710695469.5
• 申請日: 2011-05-11
• 公開（公告）號: CN107338217B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: J.許
• 申請（專利權）人: 詹森生物科技公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 黃希貴

1.一種產生表達胰腺內胚層細胞群的體外方法，其中所述群中大于60%的細胞共表達PDX1和NKX6.1，包括如下步驟：在補充了蛋白激酶C活化劑和選自能夠抑制BMP的因子、TGFβ受體信號傳導抑制劑和成纖維細胞生長因子至少一種因子的培養基中分化定形內胚層細胞的群。

2.根據權利要求1的方法，其中所述群中大于 70%, 80% 或90%的細胞共表達PDX1和NKX6.1。

3.根據權利要求1或2的方法，還包括以下步驟：

a. 培養多能干細胞群；和

b. 將多能干細胞群分化為定形內胚層細胞群。

4.根據權利要求1或2的方法，其中所述蛋白激酶C活化劑選自(2S, 5S)-(E, E)-8-(5-(4-(三氟甲基)苯基)-2,4-戊二烯酰氨基)苯并內酰胺、Indolactam V、佛波醇-12-十四酸酯-13-乙酸酯和佛波醇-12,13-二丁酸酯。

5.根據權利要求1或2的方法，其中所述蛋白激酶C活化劑是(2S, 5S)-(E, E)-8-(5-(4-(三氟甲基)苯基)-2,4-戊二烯酰氨基)苯并內酰胺。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述(2S, 5S)-(E, E)-8-(5-(4-(三氟甲基)苯基)-2,4-戊二烯酰氨基)苯并內酰胺按20nM至500nM的濃度使用。

7.根據權利要求1或2的方法，其中在補充了蛋白激酶C活化劑的培養基中再加入選自以下的至少一種因子：能夠抑制BMP的因子和TGFβ受體信號傳導抑制劑。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述能夠抑制BMP的因子是成頭蛋白。

9.根據權利要求8所述的方法，其中成頭蛋白按

a.50ng/ml至500μg/ml的濃度使用；或 b.按100ng/ml的濃度使用。

10.根據權利要求1或2的方法，其中所述TGFβ受體信號傳導抑制劑是ALK5抑制劑。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述ALK5抑制劑是ALK5抑制劑II。

12.根據權利要求11所述的方法，其中ALK5抑制劑II按

a. 0.1μΜ至10μΜ的濃度使用；或

b. 1μΜ的濃度使用。

13.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述成纖維細胞生長因子是FGF7或FGF10。

14.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述成纖維細胞生長因子可按

a. 50pg/ml至50μg/ml的濃度使用；或

b. 50 ng/ml的濃度使用。