[發明專利]血清外泌體中肺癌相關microRNA分子標記的應用及其檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201710693028.1
• 申請日: 2017-08-14
• 公開（公告）號: CN107365852B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 王弢;渠香云;董肇楠;賈蕓莉;馬雪情
• 申請（專利權）人: 江蘇為真生物醫藥技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發明公開了外泌體相關microRNA在制備診斷和預示肺癌標志物中的應用及試劑盒，開發出基于PCR平臺miRNA的兩步法檢測試劑盒，通過上調分子標志物和下調分子標志物聯合使用，在肺癌的輔助診斷方面具有突出優勢，靈敏度最低可達到1copy/μL，極大提高了檢測的準確度。另外，本發明開發出等溫擴增技術miRNA的一步法檢測體系更快速、便捷，可大大提高檢測效率，降低檢測成本。

技術領域

本發明屬于醫學分子生物學技術領域，具體涉及肺癌外泌體miRNA分子標記的應用及其試劑盒。

背景技術

外泌體(exosome)是一種廣泛存在并分布于各種體液中可由多種細胞分泌的膜性小囊泡，直徑一般介于30～120nm之間，包含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸，除了能作攜帶和傳遞重要的信號分子，形成一種全新的細胞間信息傳遞系統從而改變其他細胞的功能外，在很多生理病理上起著重要的作用。研究表明，腫瘤exosome的分子特征部分反映其來源腫瘤的表型，所攜帶的腫瘤特異性microRNA和抗原可以作為腫瘤診斷標志物。此外exosome可以選擇性的將某些細胞蛋白移出，在細胞之間傳遞很多種類型的分子，可以誘發與增強機體免疫反應，在免疫監視、炎癥反應及癌癥發生發展等許多生理和病理過程中有重要的功能。在包括膀胱癌、腦瘤、結直腸癌和黑色素瘤在內的多種腫瘤臨床病例中，均能從患者血清或尿液等體液中分離exosome用于早期臨床診斷，也可用于腫瘤的臨床風險或療效評估，以及預后判定。

外泌體中含有大量mRNA和microRNA，不僅保護體外RNA穩定存在免遭降解，還能夠作為有效的載體將RNA轉運到特定的靶細胞中，發揮重要的調控作用。Exosome承載的120多種microRNA具有多種功能。如miR-1、miR-17、miR-18、miR-181和miR-375與血管生成、造血、細胞外分泌和腫瘤的發生有關。

microRNA(又稱miRNA或miR)——作為Science 2002年十大科技突破的第一名——是21世紀生命科學研究重大發現之一，它在生物的發育時序調控和疾病的發生中起到非常重要的作用。miRNA通過調節癌基因及抑癌基因的表達，調控細胞的分化、增殖、凋亡，從而促進或抑制腫瘤的發生，期間有著復雜的調節機制，形成調控網絡，共同促進或抑制腫瘤的發生。甲基化、生物起源上的缺陷、變異、轉錄的異常以及基因組的丟失或擴增等均導致miRNA在人類腫瘤中的異常，許多miRNA直接表現為一種原癌基因或抑癌基因的作用，致癌與抑癌miRNA通過正向或負向調控腫瘤抑制基因、癌基因或控制細胞周期進程、分化或凋亡的基因，直接調控腫瘤細胞的增殖、分化和凋亡，參與腫瘤的生成、發展甚至侵襲轉移。大量的研究顯示，miRNA在腫瘤細胞、癌組織、癌旁組織、正常組織中都有特征性的表達譜改變，在腫瘤患者的血尿中也有特征性的表達水平改變，這就為腫瘤的診斷提供了新的思路，也提示miRNA可能可以成為腫瘤診斷的重要的分子生物學標志。

外周血因其具有創傷小、易獲取、可重復、可檢測指標眾多等優點，一直是臨床疾病標志物檢測的主要標本來源。近年研究發現，外周血中存在內源性循環miRNA，且因其具有較高的穩定性和特異性，有望成為諸如腫瘤等多種疾病的生物學標志物。有研究者提出，循環miRNA主要存在于外泌體中，有可能成為較好的檢測血清miRNA的來源。因此，若結合exo-miRNA的相關特點，如果能研發出相應的高特異性肺癌診斷試劑盒使之能夠應用于肺部結節良惡性輔助的鑒別診斷及科研領域，將很好地促進肺癌篩查研究及科研成果的轉化，對于良惡性肺部腫瘤的區分、診療必將起到巨大的推動作用。

目前，已有的microRNA做為檢測肺癌分子標志物的應用，因其準確性、特異性不高或需要幾個標志物同時檢測，檢測成本高等缺陷，并沒有適合商業化生產的試劑盒。