[發明專利]一種Cyr61蛋白檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201710690485.5
• 申請日: 2017-08-14
• 公開（公告）號: CN107505462A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 盛慧明;李寧麗;李海川;莊文芳;邱朝輝
• 申請（專利權）人: 上海市同仁醫院
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/536
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 齊海迪

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體而言，涉及一種Cyr61蛋白檢測試劑盒及其使用方法。

背景技術

Cyr61(cysteine-rich 61)，又稱為CCN1，蛋白由381個氨基酸殘基組成，富含半胱氨酸和脯氨酸殘基，相對分子質量為42kDa。最早被克隆的Cyr61是1985年Lau等在用血清或血小板衍生生長因子(PDGF)刺激小鼠BALB/c3T3成纖維細胞時發現的，因富含半胱氨酸(含10％的半胱氨酸殘基)被命名為Cyr61。目前已知，Cyr61廣泛表達于多種正常組織細胞，包括成纖維細胞、上皮細胞、內皮細胞、膀胱及血管平滑肌細胞、間質細胞、軟骨細胞、成骨細胞、神經細胞等。

Cry61是一種十分重要的細胞基質調節因子在細胞的黏附、遷移與增殖以及血管生成、炎癥反應和組織重構等重要生理、病理過程中發揮重要的調節作用。而Cyr61異常的表達會導致癌癥和一些慢性炎癥疾病的發生。本發明申請人之前曾經發現Cyr61的異常表達升高會導致滑膜的過度增生導致骨關節腔的破壞，在風濕性關節炎進程中有著非常重要的作用；Cyr61的高表達刺激角質形成細胞，促進其增生導致皮膚增厚參與銀屑病的發生發展；還發現Cyr61可以刺激滑膜細胞使得IL-8表達提高，募集中性粒細胞到局部參與炎癥反應，因此檢測Cyr61的表達豐度具有非常重要的臨床意義。然而目前Cyr61在正常人外周血清中濃度情況卻并不是非常明確，以及它未來是否能作為一個血清學檢查指標也不是很清楚。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種Cyr61蛋白檢測試劑盒，以解決上述問題。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

本發明涉及一種Cyr61蛋白檢測試劑盒，所述試劑盒包括Cyr61捕獲抗體、Cyr61檢測抗體、Cyr61檢測抗體對應的二抗、辣根過氧化物酶標記的親和素試劑以及辣根過氧化物酶顯色底物；

所述Cyr61檢測抗體對應的二抗標記有生物素。

本發明采用抗Cyr61單抗和多抗，建立了雙抗夾心法檢測Cyr61的含量。該試劑盒檢測靈敏度高，可重復性好。

根據本發明的一方面，本發明還涉及使用如上所述的試劑盒檢測Cyr61蛋白的方法，包括：

1).將包被有Cyr61捕獲抗體的固相支持物用封閉液進行封閉化處理；

2).加入稀釋后的待檢樣品和標準品，與Cyr61捕獲抗體孵育結合；

3).加入Cyr61檢測抗體進行孵育；

4).加入Cyr61檢測抗體對應的二抗進行孵育；

5).加入辣根過氧化物酶標記的親和素試劑進行孵育；

6).加入辣根過氧化物酶顯色底物進行顯色反應；

7).終止反應，檢測OD值，根據OD值的大小判斷Cyr61的蛋白含量。

該方法敏感性高，操作簡單。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

本試劑盒能特異性地檢測Cyr61的含量。該試劑盒靈敏度高且操作簡單，檢測患者樣本時，不需要進行樣品酸化。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為實施例3檢測得到的標準曲線；

圖2為雙抗夾心法檢測Cyr61含量時OD值與Cyr61濃度的曲線；

圖3為RA和OA患者滑液中Cyr61含量比較結果。

具體實施方式

根據本發明的一方面，涉及一種Cyr61蛋白檢測試劑盒，所述試劑盒包括Cyr61捕獲抗體、Cyr61檢測抗體、Cyr61檢測抗體對應的二抗、辣根過氧化物酶標記的親和素試劑以及辣根過氧化物酶顯色底物；

所述Cyr61檢測抗體對應的二抗標記有生物素。