[發(fā)明專利]一種熒光微量RNA的檢測裝置及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710690115.1
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107421935A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發(fā)明（設計）人: 鞠拓宇;于源華;寧春玉;張昊;宮平;張曉
• 申請（專利權(quán)）人: 長春理工大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 長春眾益專利商標事務所(普通合伙)22211
• 代理人: 紀尚

1.一種熒光微量RNA的檢測裝置，其特征是：

激發(fā)光源A位于樣品槽左側(cè)，激發(fā)光源B位于樣品槽右側(cè)，分別焊接在電路板上，嵌于光傳輸通道內(nèi)，用于激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)；激發(fā)光探測單元A位于激發(fā)光源A與樣品槽之間，激發(fā)光探測單元B位于激發(fā)光源B與樣品槽之間，激發(fā)光探測單元B與樣品槽高度均低于激發(fā)光源B，激發(fā)光探測單元B與樣品槽焊接在電路板上，嵌于光傳輸通道內(nèi)，保證激發(fā)光能照射到樣品槽內(nèi)樣品；

熒光探測單元A、熒光探測單元B分別垂直位于樣品槽與激發(fā)光光路的兩側(cè)，焊接在電路板上，嵌于光傳輸通道內(nèi)；

光傳輸通道為封閉式光傳輸通道，底部通過膨脹螺栓固定于電路板上；

濾光片A、濾光片B分別位于激發(fā)光源A、激發(fā)光源B與樣品槽之間，嵌于光傳輸通道內(nèi)；

信號檢測單元焊接在電路板上，用于將熒光探測單元A、熒光探測單元B轉(zhuǎn)換的電信號，進行前置放大、解調(diào)、濾波、采集；

主控單元焊接在電路板上；

激發(fā)光控制單元焊接在電路板上；

液晶顯示單元鑲嵌于殼體上表面，通過通訊線纜與電路板連接。

2.如權(quán)利要求1所述的一種熒光微量RNA的檢測裝置，其特征是：

熒光探測單元A、熒光探測單元B分別垂直位于樣品槽與激發(fā)光光路的兩側(cè)，焊接于電路板上，嵌于光傳輸通道內(nèi)；測量范圍為300-1,000nm；發(fā)射通道為綠光510–580nm、紅光665–720nm；選擇藍光激發(fā)時，讀取綠色或遠紅外通道的熒光；當激發(fā)光為紅光時，只讀取遠紅外通道的熒光。

3.一種熒光微量RNA的檢測方法，其方法是：

采用PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)，

PikoGreen dsDNA定量試劑盒組分是

A為1×定量緩沖液 250mL，

B為100×反應液 5mL，

C為100×反應增強液 5mL，

D為dsDNA標準品 9×0.5mL；

步驟一：使用之前，將產(chǎn)品由存儲條件下取出恢復至室溫，每個組分充分震蕩或渦旋混勻、離心，以避免不必要的試劑損耗；

步驟二：配制雙鏈DNA定量試劑；工作液，按照1:199的配比，分別吸取2×TE緩沖溶液與無菌去離子水(定量緩沖液A)，混勻；新配工作液應該在1小時之內(nèi)使用；

步驟三：制作標準品，取兩個EP管，每支管按照1:19的配比加入不同濃度的dsDNA標樣與工作液，混勻，總體積為200μL，得到標準品1與標準品2；

步驟四：制作標準曲線，將兩個標準品依次放入熒光計樣品槽內(nèi)，室溫孵育兩分鐘，使用激發(fā)波長為350nm，發(fā)射波長為460條件測量熒光值，可確定出標準曲線；

步驟五：檢測樣品的DNA濃度，按照1:199與1：9之間的配比，取待測樣品與稀釋緩沖液混勻，總體積為200μL；放入熒光計樣品槽內(nèi)，室溫孵育兩分鐘，讀取與樣本熒光強度相對應的DNA濃度；

所有試劑處于室溫之下，樣品混勻放入樣品槽內(nèi)需要室溫孵育兩分鐘；

得到的標定值可儲存，方便以后使用；檢測數(shù)據(jù)可存儲，最多可存儲1,000個樣品結(jié)果，并且可通過U盤導出；此外，在樣品的延伸范圍或超過試劑盒的檢測范圍，儀器屏幕上均會有圖形顯示。