[發(fā)明專利]一種誘導(dǎo)多花梾木愈傷組織形成的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710686445.3
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107360973B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉衛(wèi);周余華;史卓林;顧敏敏;胡修武;侯波
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷麗;許丹丹

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)，尤其涉及一種誘導(dǎo)多花梾木愈傷組織形成的方法。

背景技術(shù)

多花梾木，山茱萸科，梾木屬，又稱大花四照花，原產(chǎn)于北美洲東部，多花梾木四季景色各有不同，春天花瓣?duì)畎㈤_，夏秋有色彩絢爛的葉片，花后有桔紅色的漿果，是高檔的景觀植物和油料植物，市場前景廣闊，我國尚處于引種階段。多花梾木一般采用種子播種、扦插方法繁殖。本專利對多花梾木進(jìn)行組培繁殖，通過對多花梾木器官組織進(jìn)行培養(yǎng)，促進(jìn)愈傷組織的形成，從而培育出更多的多花梾木的苗木，這是多花梾木組織培養(yǎng)的重要途徑。

多花梾木是新引進(jìn)品種，所以國內(nèi)對多花梾木的組織培養(yǎng)相關(guān)方面的研究很少，但是有少數(shù)學(xué)者對于梾木屬的其他植物進(jìn)行過一些組織培養(yǎng)的研究，但是繁殖系數(shù)比較低。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明提供一種誘導(dǎo)多花梾木愈傷組織形成的方法，以莖為外植體，在短時間內(nèi)誘導(dǎo)獲得大量的愈傷組織。

技術(shù)方案：本發(fā)明所述的誘導(dǎo)多花梾木愈傷組織形成的方法，包括：以多花梾木的莖為外植體，消毒后接種于培養(yǎng)基上進(jìn)行光照培養(yǎng)；其中所述培養(yǎng)基的配方為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+6-BA 1-2mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L+蔗糖30-40g/L+瓊脂6-9g/L。

所述外植體的制備方法為：采集多花梾木當(dāng)年生枝條嫩莖，剪切成長1-3cm 的莖段。

所述消毒的方法包括：將外植體洗凈后，先用70-75％酒精處理30-50s，無菌水清洗后再用0.1-0.2％升汞進(jìn)行消毒處理，處理時間為3-6min，最后用無菌水沖洗干凈，去除殘余水分。

酒精處理的時間優(yōu)選為30s，升汞的處理時間優(yōu)選為5min。

培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+6-BA 1.5-2mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L+蔗糖 30-40g/L+瓊脂6-9g/L。

進(jìn)一步優(yōu)選的，培養(yǎng)基的配方為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+6-BA 2mg/L和NAA 0.2mg/L +蔗糖35g/L+瓊脂7g/L。

所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為WPM。

所述光照培養(yǎng)的溫度為23-27℃，光照時間為16-17h/d，光照度為 2000-2200lx。

有益效果：本發(fā)明探索出積極而有效的多花梾木莖組織培養(yǎng)新方法，對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、消毒方法進(jìn)行了優(yōu)化，可在短時間內(nèi)誘導(dǎo)獲得大量的愈傷組織。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1正在清洗的多花梾木莖外植體；

圖2為實(shí)施例1準(zhǔn)備滅菌的部分培養(yǎng)基；

圖3為實(shí)施例1正接種到培養(yǎng)基上的莖外植體；

圖4為實(shí)施例1放在培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)的接種苗；

圖5為實(shí)施例1污染的接種苗；

圖6為實(shí)施例1已形成大量愈傷組織的接種苗。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實(shí)施例1

1、采集和清洗外植體

采集多花梾木當(dāng)年生枝條嫩莖，剪切成長約1-3cm的莖段，放入白瓷缸中用加了少量洗衣粉的水淘洗2min，將泡沫淘洗干凈后于自來水下沖洗2h。將去掉了表面灰塵和泥土的外植體放在超凈工作臺上消毒處理。

2、進(jìn)行消毒處理

先用75％酒精處理30-50s，然后用無菌水清洗一次，再用0.1％升汞進(jìn)行消毒處理，處理時間為3-6min，再用無菌水沖洗3次以上，殘留的水分用無菌紙吸取。

3、進(jìn)行接種工作

將消毒完畢的莖置于無菌紙上，用鑷子接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基分別選用 WPM、MS、1/2MS、B5、N6，選用不同的6-BA和NAA的濃度：6-BA濃度分別為0、0.5、1、2mg/L，NAA的濃度分別是0、0.02、0.2、2mg/L，研究不同激素不同濃度下對外植體產(chǎn)生愈傷組織的影響。每一處理接種30瓶，重復(fù)3次，每試管瓶放置1個外植體。

4、控制培養(yǎng)條件

所有的培養(yǎng)基均添加蔗糖35g/L，瓊脂7g/L，調(diào)節(jié)pH值為5.8左右，在121℃高壓下滅菌25min。將接種后的外植體置于培養(yǎng)室內(nèi)，光照16h/d，光照度約為 2000lx，溫度控制在(25±2)℃。

5、結(jié)果與分析

5.1得出多花梾木莖最合適的消毒時間

表1不同消毒方式的影響