[發明專利]兩種具有免疫調節的鐵皮石斛葉多糖的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710685933.2
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107286269B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 劉克海;鄔軍文;韓娟娟;張敏;姚昀;崔明曉;束紅梅
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P37/02;A61P35/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

1.一種鐵皮石斛葉多糖，其特征在于，所述的鐵皮石斛葉多糖由以下步驟的制備方法制得：

(1)將干燥鐵皮石斛葉研磨、粉碎、過20目篩，隨后向鐵皮石斛葉粉末加入5倍量的石油醚，攪拌使充分接觸，靜置2h，棄上層石油醚，重復操作3次，最后將石油醚減壓揮干，得鐵皮石斛葉脫脂粉末；加水，鐵皮石斛葉脫脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃減壓濃縮，得濃縮液；

(2)向濃縮液加入3倍體積的Sevage試劑，所述的Sevage試劑為氯仿:正丁醇＝3:1，劇烈振蕩30min，4000rpm離心20min，取上清，重復操作5次；隨后60℃減壓濃縮除去有機試劑并將溶液濃縮；

(3)向濃縮液加入3倍體積的85％乙醇，室溫下靜置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃離心收集沉淀；將沉淀物溶解于蒸餾水中，冷凍干燥得粗多糖；

(4)取粗多糖0.2g，配置成濃度為100mg/mL的溶液，上樣量為2mL，經DEAE-52纖維素離子交換柱分離，依次用濃度為0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl溶液洗脫，自動部分收集器收集，流速為1mL/min，4min每管；收集第3-15管，合并后經濃縮、透析、冷凍干燥得多糖A-1；

(5)多糖A-1配置成濃度為100mg/mL的溶液，上樣量為2mL，經Sephadex G-100柱分離，用0.1mol/L NaCl溶液洗脫，自動部分收集器收集，流速為1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法檢測，收集第9-14管，合并后經濃縮、透析、冷凍干燥得鐵皮石斛葉多糖。

2.根據權利要求1所述的鐵皮石斛葉多糖，其特征在于，所述的鐵皮石斛葉多糖平均相對分子量為28342Da，主要由摩爾比為3.21:1.11:0.23的半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖組成，以及痕量的木糖、葡萄糖和甘露糖。

3.根據權利要求1所述的鐵皮石斛葉多糖的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括以下步驟：(1)鐵皮石斛葉經粉碎機器粉碎，再過20目篩得到鐵皮石斛葉粉末；(2)鐵皮石斛葉粉末經石油醚浸泡脫脂得到脫脂鐵皮石斛葉粉末；(3)脫脂鐵皮石斛葉粉末加水，鐵皮石斛葉脫脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃減壓濃縮，得濃縮液；(4)鐵皮石斛葉水提液經Sevage法除蛋白，85％乙醇沉淀，最后冷凍干燥獲得粗多糖；(5)取粗多糖0.2g，配置成濃度為100mg/mL的溶液，上樣量為2mL，經DEAE-52纖維素離子交換柱分離，依次用濃度為0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl溶液洗脫，自動部分收集器收集，流速為1mL/min，4min每管；收集第3-15管；(6)第(5)步的洗脫液合并后濃縮、透析、冷凍干燥獲得多糖A-1；(7)多糖A-1配置成濃度為100mg/mL的溶液，上樣量為2mL，經Sephadex G-100柱分離，用0.1mol/L NaCl溶液洗脫，自動部分收集器收集，流速為1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法檢測，收集第9-14管；(8)第(7)步的洗脫液合并后濃縮、透析、冷凍干燥得到鐵皮石斛葉多糖。