[發(fā)明專利]一組用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的引物對(duì)組合及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710684735.4
• 申請(qǐng)日: 2017-08-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107653308B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊帆;劉小山
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市星系生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市中知專利商標(biāo)代理有限公司 44101
• 代理人: 呂曉蕾

本發(fā)明公開(kāi)了用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的引物對(duì)組合及試劑盒。所述引物對(duì)組合分別為SEQ ID NO:1?2，SEQ ID NO:3?4和SEQ ID NO:5?6。其中SEQ ID NO:1?2對(duì)應(yīng)CD157基因；SEQ ID NO:3?4對(duì)應(yīng)IL?1b基因；SEQ ID NO:5?6對(duì)應(yīng)MS4A6A基因。利用本發(fā)明的引物進(jìn)行RT?PCR擴(kuò)展，然后將相關(guān)的基因表達(dá)水平代入建立的公式中，能將活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人區(qū)分，使得結(jié)核診斷更加準(zhǔn)確、快速。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一組用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的引物對(duì)組合及試劑盒。

背景技術(shù)

結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染性疾病，結(jié)核分枝桿菌不僅可引起肺結(jié)核(85％)，而且可引起肺外多種器官的結(jié)核病。盡管目前已有有效的抗結(jié)核藥物，但結(jié)核病仍然是當(dāng)前感染性疾病的頭號(hào)殺手，全球每年約200萬(wàn)人死于結(jié)核病；全球約三分之一的人口感染結(jié)核分枝桿菌，在這些被稱為結(jié)核菌潛伏感染(LTBI)的人群中，有約10％最終將進(jìn)展為活動(dòng)性結(jié)核病。

由于目前缺乏有效的結(jié)核病疫苗，結(jié)核病的預(yù)防控制主要依賴于早期發(fā)現(xiàn)、治療、隔離活動(dòng)性結(jié)核病人。然而，現(xiàn)今診斷活動(dòng)性結(jié)核病的檢測(cè)技術(shù)存在嚴(yán)重不足，不能滿足臨床和結(jié)核病預(yù)防控制的要求。結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為痰結(jié)核分枝桿菌微生物檢查(痰圖片或痰培養(yǎng))，該檢測(cè)技術(shù)雖然特異性高，但存在敏感性低(不足40％)，耗時(shí)長(zhǎng)(結(jié)核菌培養(yǎng)耗時(shí)1-2個(gè)月)，實(shí)驗(yàn)室生物安全要求高的缺點(diǎn)。換而言之，目前60％-70％痰菌陰性的結(jié)核病人臨床上的診斷需要其他的檢測(cè)和數(shù)據(jù)支持。事實(shí)上，臨床上該類型的結(jié)核病人的診斷大多數(shù)是臨床診斷，即依靠臨床表現(xiàn)、影像學(xué)或抗結(jié)核治療效果進(jìn)行診斷。這種診斷方法最大的缺點(diǎn)是不能將結(jié)核病與其結(jié)核菌引起的他肺部疾病區(qū)分。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一組用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的引物對(duì)組合及試劑盒。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種CD157、IL-1b和MS4A6A組合作為區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的分子標(biāo)志物的用途。

本發(fā)明還提供一組用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的引物對(duì)組合，其特征在于，所述引物對(duì)組合分別為SEQ ID NO:1-2，SEQ ID NO:3-4和SEQ ID NO:5-6；其中SEQ ID NO:1-2對(duì)應(yīng)CD157基因；SEQ ID NO:3-4對(duì)應(yīng)IL-1b基因；SEQ ID NO:5-6對(duì)應(yīng)MS4A6A基因。

本發(fā)明還提供一種用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求2所述的引物對(duì)組合。

所述引物對(duì)組合及所述試劑盒用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的用途。

所述引物對(duì)組合及所述試劑盒用于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病人與非結(jié)核性肺炎病人的方法，其特征在于，

分別采用SEQ ID NO:1-2，SEQ ID NO:3-4或和SEQ ID NO:5-6作為引物，對(duì)待測(cè)病人PBMC的DNA進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)；

計(jì)算每個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量：根據(jù)實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果，分別檢測(cè)出3個(gè)基因的熒光定量CT值，通過(guò)R語(yǔ)言算法包Glmnet，建立機(jī)器學(xué)習(xí)模型套索/彈性網(wǎng)模型LASSO，然后得到蛋白組合換算的結(jié)果，用R表示；

結(jié)果判斷：當(dāng)R>0.5時(shí)，則判斷為活動(dòng)性結(jié)核；反之，則為非結(jié)核性肺炎病人。

進(jìn)一步，所述RT-PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系為：

進(jìn)一步，所述RT-PCR反應(yīng)的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃30秒；95℃5秒，60℃30秒，40個(gè)循環(huán)。