[發明專利]一種與鯊烯合酶相互作用蛋白SmSIP1及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710684274.0
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN109385407B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 黃璐琦;榮齊仙;姜丹;林慧馨;陳宜均
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/82;C12N15/70;C12N5/10;C12N1/21;C12R1/19
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本發明公開了一種與鯊烯合酶相互作用蛋白SmSIP1及其制備方法與應用。本發明選擇丹參鯊烯合酶SmSQS1為研究目標，通過酵母雙雜交系統構建cDNA文庫，篩選到了一個與SmSQS1存在相互作用的候選蛋白，長度為274個氨基酸，將其命名為SmSIP1，通過酵母回轉驗證及體內的LUC實驗發現，SmSQS1與SmSIP1確實存在相互作用。本發明為深入研究鯊烯合酶的功能機制奠定了基礎，并為甾醇和三萜類生物合成的進一步研究和工業化生產提供了理論依據。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種與鯊烯合酶相互作用蛋白SmSIP1及其制備方法與應用，特別涉及一種與丹參鯊烯合酶相互作用蛋白SmSIP1及其制備方法與應用。

背景技術

隨著生命科學研究的快速發展，人們發現基因組的序列信息并不能夠完整解釋各種生命過程及現象，蛋白質作為細胞活性及功能的體現者，在生命過程中具有不可替代的作用。但每個蛋白質并不是獨立的在細胞中被賦予功能，而是與其他蛋白質通過相互作用的方式形成大的復合體，在特定的時間和空間內完成特定的功能，而且有些蛋白質的功能只有在復合體形成后才能發揮出來，因此，對蛋白質-蛋白質之間相互作用的深入研究是認識和理解各種生命現象的必要前提。

藥用植物有效成分的合成是在一系列關鍵酶的催化下生成的，如萜類、黃酮類、木質素類化合物的合成都涉及到一系列關鍵酶。合成黃酮的酶之間存在互作而且影響下游產物的合成，但是對于萜類化合物生物合成途徑中的關鍵酶在植物體內的存在方式以及它們之間相互作用的研究目前報道較少。

鯊烯合酶(squalene synthase，SS或SQS)可催化兩分子的法呢酰基二磷酸(farnesyl diphosphate，FPP)縮合生成甾醇和三萜類化合物的第一個前體—鯊烯(SQ)，以FPP為底物還可以生成倍半萜、赤霉素和類胡蘿卜素等其他異戊二烯類化合物，所以SQS處于萜類代謝途徑中FPP到其它產物的分支點上，是生物合成三萜、甾醇、膽固醇等萜烯類物質中的一個關鍵酶，其含量和活性決定了后續產物的產量。為進一步了解SQS的功能，試圖從尋找SQS的相互作用蛋白入手，通過研究他們之間的相互作用特點和方式，進而揭開以SQS為核心的蛋白互作網絡以及SQS的作用機理。

酵母雙雜交(yeast-2-hybrid)是Fields等人于1989年提出并初步建立的，其理論基礎是基于對真核細胞轉錄調控過程的認識。該技術的出現，為研究一類蛋白與其他蛋白是否發生相互作用或者驗證兩種蛋白相互作用提供了可靠的研究依據。由于這種方法是通過轉錄激活報告基因篩選相互作用的蛋白，不必經過繁雜的分離純化過程就可獲得編碼某種蛋白的基因，因而目前已在信號傳導、細胞凋亡、細胞周期與分化、癌基因產物功能、基因表達調控以及蛋白質自身特性等方面的研究中得到了廣泛的應用。

丹參是我國傳統中藥，為唇形科鼠尾草屬植物，具有祛瘀止痛、活血通經、涼血消癰、清心除煩之功，常用于心血管系統和血液系統等疾病的治療。由于其分布區廣、生命力強、世代周期短、組織培養和轉基因技術體系成熟、基因組小、染色體數目少等特點，被認為是中藥研究的理想模式生物。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種蛋白質。

本發明提供的蛋白質的名稱為SmSIP1蛋白質，SmSIP1蛋白質是如下A1)或A2)或A3)或A4)的蛋白質：

A1)氨基酸序列是序列2所示的蛋白質；

A2)在序列2所示的蛋白質的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質；

A3)將序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白質；

A4)與序列2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白質。

其中，序列2由274個氨基酸殘基組成。