[發明專利]一種鐵皮石斛外植體的培養方法

在審

• 申請號: 201710683727.8
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN107347649A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 陳禮培;李俊發;陳萍;王惠珍;何麗爛;鄧日烈
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 王國標

技術領域

本發明涉及植物外植體培養領域，特別涉及一種鐵皮石斛外植體的培養方法。

背景技術

鐵皮石斛為蘭科石斛，屬多年生附生草本植物，又名黑節草，是一種珍貴的藥用植物，因其表皮呈鐵綠色而得名，自古以來鐵皮石斛就被認為是滋陰補益的珍品。

鐵皮石斛在《神農本草經》中列為上品，具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳等功效，用于熱病傷津、口干煩渴、病后虛熱等多種病癥。鐵皮石斛富含多糖等有效成分，對咽喉疾病、腸胃疾病、白內障、糖尿病具有顯著療效，還具有抗腫瘤，抗衰老，增強人體免疫力及擴張血管等作用。除藥用價值外，國內還用來生產保健品，沿海發達地區現在還流行用鐵皮石斛制成高檔茶、飲料等；以鐵皮石斛加工而成的“西楓斗”，國際市場價格為每公斤1300美元，“龍頭鳳尾型鐵皮楓斗”國際市場價格為每公斤3000美元，鐵皮石斛用途廣，需量大，價格高，據有關部門調查算測，鐵皮石斛全國年需求量達30000噸以上。

今十幾年來，隨著研究的深入發現它含有石斛多糖、石斛堿、石斛苷、石斛胺和石斛次堿等，以及18種氨基酸和多種微量元素等物質，具有顯著提高免疫力功能，抑制腫瘤生長和擴張腸系膜動脈血管等作用，頗具市場開發價值。

鐵皮楓斗是將鐵皮石斛的莖利用一定的加工工藝精制而成，主要講莖間比較矮小、莖肉質粗壯、質地柔軟富含膏滋黏液的植株，經過烘干后，用手工雙向扭曲而成。到2006年底，全國有鐵皮石斛為原料的藥品2個，保健食品79個；劑型有顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊、口服液、丸劑、茶、飲料、口含片等。

中國野生藥用植物據統計在5000種以上，其中較常用的有500多種，依靠人工栽培的有250多種。傳統的獲取中草藥的方法是依靠大量的采摘野生植物資源為來源，而野生藥用植物資源有限，當采摘量超過其自然繁殖的再生能力時，必然導致該物種遭受破壞甚至會面臨瀕危。同時，隨著生態環境的日益惡化，也必將進一步導致部分藥用植物資源的匱乏。

鐵皮石斛野生于我國秦嶺和長江流域以南，海拔500～1000m的巖溶峰谷，氣候高溫、高濕地區。在國內主要分布于云南、安徽、貴州、浙江、江西、廣西、廣東等省區。以云南、廣西的“喀斯特”地貌區為主產區。其自然生長于高山峻嶺的懸崖壁和巖石縫之間，對生長條件要求十分苛刻。再說，鐵皮石斛種子極小，無胚乳，自然條件下需與某些真菌共生才能萌發，自然繁殖率極低，加上人為過渡采集和自然環境破壞，目前我國野生鐵皮石斛資源瀕臨滅絕，已被列為國家二級保護植物。

通過組織培養可以解決野生資源瀕危的難題。組織培養是實現快速繁殖、人工栽培的最佳技術手段，一般采用野生鐵皮石斛植株，選擇合適的外植體接種到培養基上進行細胞培養，以達到無激素、無污染，克服地域、氣候等條件的制約，在保證藥效的前提下增加市場供應量，滿足人們的健康需求。

其中在鐵皮石斛外植體的叢生芽誘導培植過程中，其培養基的設置和培養條件尤為重要，如何使得鐵皮石斛外植體的培養更高效，叢生芽生長情況更好，成為一個急切解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于針對上述現有技術的不足，提供一種鐵皮石斛外植體的培養方法。

本發明所采取的技術方案是：一種鐵皮石斛外植體的培養方法，其包括如下步驟：

1)以1/2MS培養基作為基本培養基，添加植物激素復配物，得誘導培養基，滅菌處理，待用；

2)取鐵皮石斛外植體置于步驟1)的誘導培養基中，在溫度為23～27℃，光照強度為1500～2000Lx，光照時間為12h/d，相對濕度為55～65％的培養條件下進行鐵皮石斛叢生芽誘導培養；

其中所述植物激素復配物由2mg/L的6-BA和0.5mg/L的NAA混合復配而成。

作為上述方案的進一步改進，步驟1)所述1/2MS培養基中的瓊脂含量為0.9％，蔗糖濃度為3％，pH值為5.8～5.9。

作為上述方案的進一步改進，步驟1)所述滅菌處理為在121℃、105Pa的條件下滅菌20min。

作為上述方案的進一步改進，步驟2)所述的鐵皮石斛叢生芽誘導培養的培養周期為2個月。

本發明的有益效果是：本發明在基本培養基中添加了特定的植物激素復配物，使其對鐵皮石斛外植體具有優異的叢生芽增殖作用，并通過限定培養條件，使得培養出的鐵皮石斛叢生芽表現出健壯、飽滿的良好生長狀況。

具體實施方式