[發明專利]一種HER2融合單鏈抗體、制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710683659.5
• 申請日: 2017-08-11
• 公開（公告）號: CN109385430B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 張雷;李杉;李俊敏
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C07K19/00;C12N9/04;C12N9/02;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蔡茂略

本發明公開了一種HER2融合單鏈抗體、制備方法與應用。該HER2單鏈抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，所述的重鏈可變區的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的輕鏈可變區的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明還提供了一種融合單鏈抗體，由多肽片段的C端通過接頭的方式與所述的HER2單鏈抗體的N端連接而成；其中，所述的多肽片段為蘋果酸脫氫酶的片段或細胞色素氧化酶的片段。該融合單鏈抗體與HER2單鏈抗體有相同的親和活性，且對HER2陽性乳腺癌細胞BT474的殺傷效果顯著提高，而對HER2陰性乳腺癌細胞MCF?7生長無影響，可用于抗癌藥物的制備中。

技術領域

本發明屬于生物技術領域和醫學領域，特別涉及一種HER2融合單鏈抗體、制備方法與應用。

背景技術

2014年世界衛生組織國際癌癥研究中心最新數據統計顯示，全球每年約140萬女性發生乳腺癌，病死率高達33％。我國乳腺癌的發病率居女性惡性腫瘤首位，病死率僅次于肺癌，嚴重影響女性的生活質量和生存壽命。目前，乳腺癌治療方法主要有：新輔助治療、手術治療、輔助放化療、內分泌治療和靶向治療。近年來，靶向治療能夠使患者更大程度的獲益，與化療相輔相成，且釆用化學方法連接抗體和藥物，合成抗體偶聯物已成為研究熱點，既能特異性地識別腫瘤細胞，又能高效地殺死靶細胞，從而達到高效低毒的治療目的。

基因過度表達可導致細胞過度增殖和表型惡性轉化，在腫瘤中會出現不同的基因表型，而這些基因表型對腫瘤的治療提供有效的靶點。HER2是一種酪氨酸激酶受體，在25％～30％乳腺癌中過表達，且與腫瘤的侵襲性及患者的預后相關。1998年美國FDA批準靶向HER2的人源化單克隆抗體曲妥珠單抗(Trastuzumab，Herceptin)上市，Trastuzumab在臨床上的成功應用促進了以HER2單克隆抗體為導向的單抗靶向藥物研究。已有超過30種的單克隆抗體藥物被批準用于臨床治療。以低排斥反應等優點的人源化及全人抗體近年來發展迅速，在FDA批準的抗體藥物中已占80％以上，已成為抗體藥物發展的主要趨勢。但由于大分子蛋白的人源化及全人抗體具有很強的免疫原性，影響了治療效果。單鏈片段抗體技術則克服了這些缺點，單鏈抗體是由抗體重鏈可變區和輕鏈可變區通過15～20個氨基酸的肽連接而成的重組蛋白，與完整抗體相比，其保持了抗原親和活性。由于它的分子量小，組織穿透能力強，較易穿透細胞外間隙到達深部的腫瘤細胞；由于它缺乏Fc段，喪失完整抗體的效應功能如抗體依賴細胞毒作用(ADCC)或補體依賴細胞毒作用(CDCC)使得免疫原性較弱，日益成為診斷和治療的良好導向載體；因此，如何充分利用單鏈片段抗體的靶向功能是目前研究的重點。

臨床試驗結果表明，由美國Genentech公司開發靶向HER2的人源化單克隆抗體曲妥珠單抗(Trastuzumab，Herceptin)，單獨應用時有效率為11.6％～16％。由于抗腫瘤抗體能特異性的識別腫瘤細胞，但較低的殺傷能力而使其抗腫瘤效果不佳；因此，如何提高抗體的靶向性及細胞毒性作用成為目前亟待解決的問題。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種HER2單鏈抗體。

本發明的另一目的在于提供一種融合單鏈抗體。

本發明的又一目的在于提供所述的HER2單鏈抗體或所述的融合單鏈抗體的制備方法。

本發明的再一目的在于提供所述的HER2單鏈抗體或所述的融合單鏈抗體的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種HER2單鏈抗體(scFv)，包含重鏈可變區和輕鏈可變區，編碼所述的重鏈可變區的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼所述的輕鏈可變區的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的重鏈可變區和輕鏈可變區指單克隆抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區；所述的單克隆抗體為曲妥珠單抗。