[發明專利]一種用于檢測TNF?a基因SNP位點rs1799724基因型的擴增引物、試劑盒、方法及其應用

在審

• 申請號: 201710682248.4
• 申請日: 2017-08-10
• 公開（公告）號: CN107299144A
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 杜予和;陳萌萌;曾憲鍫;馬淑雯;鐘國娣;古潔若
• 申請（專利權）人: 廣州和康醫療技術有限公司;廣州達安臨床檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 袁燕清

1.一種用于檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型的擴增引物，其特征在于，所述的擴增引物的序列為：

正向引物Primer-F：CAGCAATGGGTAGGAGA；

反向引物Primer-R：CTTCTCAGGGCCCCAG。

2.一種用于檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括有如權利要求1所述的引物對和特異探針，所述的特異探針序列Probe-C：CCCCTTAACGAAGACAG，序列5’段使用FAM標記，3’端用MGB標記；特異探針序列Probe-T:CCCCTTAATGAAGACAG,序列5’段使用VIC標記，3’端用MGB標記。

3.一種檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟：

1)、提取待測樣本的外周血基因組DNA；

2)、PCR擴增：所使用的擴增引物序列為：正向引物Primer-F：CAGCAATGGGTAGGAGA，反向引物Primer-R：CTTCTCAGGGCCCCAG；特異探針序列Probe-C：CCCCTTAACGAAGACAG，其中序列5’段使用FAM標記，3’端用MGB標記，特異探針序列Probe-T:CCCCTTAATGAAGACAG,其中序列5’段使用VIC標記，3’端用MGB標記；

PCR擴增反應組分：

擴增程序為：95℃預變性3min；95℃變性15s，58℃退火20s；65℃延伸40s；40個循環；

4)、熒光信號的收集：選擇FAM和VIC，數據的采集定在65℃；

5)、通過收集的FAM和VIC的熒光信號進行結果分析，對基因型進行判定。

4.如權利要求3所述的一種檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型的方法，其特征在于，步驟5)中的判定方法為：以Allele 1是設置為FAM，Allele 2是設置為VIC，X軸為Allele 1信號,Y軸為Allele 2，進行散點圖判讀：

如果位置靠近X軸，判讀為CC樣品為CC型；

如果位置靠近Y軸，判讀為TT樣品為TT型；

如果位置靠近對角線，判讀為CT樣品為CT型。

5.如權利要求3所述的一種檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型的方法，其特征在于，步驟5)中的判定方法為：采用曲線分析判讀：

如果只有一條擴增曲線，判讀為CC或者TT型；

如果有2條擴增曲線，判讀為CT樣品為CT型；

如果無擴增曲線，樣本基因型無法判讀，需要重新檢測。

6.一種檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型的應用，其特征在于，通過檢測TNF-a基因SNP位點rs1799724基因型預測AS患者對TNF-α拮抗劑的治療有效性。