[發(fā)明專利]一種復(fù)合酶法提取肝素鈉技術(shù)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710681725.5
• 申請(qǐng)日: 2017-08-10
• 公開（公告）號(hào): CN107267572A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 菜同文;菜俊偉;菜俊林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鹽城盛大腸衣食品有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/04
• 分類號(hào): C12P19/04
• 代理公司: 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11246
• 代理人: 文芳

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種肝素鈉技術(shù)，尤其是一種復(fù)合酶法提取肝素鈉技術(shù)背景技術(shù)。

背景技術(shù)

目前我國(guó)生產(chǎn)幾乎全部采用豬小腸為原料，在常規(guī)反應(yīng)器內(nèi)運(yùn)用鹽解法、堿解法和酶解法等幾種，其中鹽解法應(yīng)用最為普通，其生產(chǎn)工序是：原料(腸黏膜)、常規(guī)反應(yīng)器內(nèi)鹽水提取、過(guò)濾、樹脂吸附、洗脫、乙醇沉淀、脫水、干燥、肝素鈉粗品。

上述方法生產(chǎn)肝素鈉的工藝過(guò)程雖然比較簡(jiǎn)單易于實(shí)現(xiàn)，但存在的不足之處在于過(guò)程的精致，因?yàn)榇制犯嗡剽c經(jīng)反復(fù)的酸堿處理，不僅會(huì)使肝素鈉的收率減少，而且對(duì)肝素鈉的生物活性也影響很大，尤其效價(jià)很難達(dá)到90USPu/mg以上，并且時(shí)間較長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是在于提供一種復(fù)合酶法提取肝素鈉技術(shù)，利用雙酶組進(jìn)行酶促提取肝素納，通過(guò)選擇酶的種類、酶組合的比例、超聲場(chǎng)的強(qiáng)度、控制好時(shí)間以及其他幾道工序制成肝素鈉。

該方法采用以下步驟：

(a)、將刮制好的小腸粘膜抽入常規(guī)酶解罐，在加溫前先加入重量比為2.3％-2.8％的精鹽，調(diào)PH值到9.0-9.2；

(b)、將步驟(a)中的溶液加溫到40℃-45℃時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶，并且使其比例在10∶0.5到10∶5之間，雙酶在步驟(a)中溶液的重量比為0.3％-0.4％，繼續(xù)加溫到50℃-55℃，保溫酶解2h-5h，然后繼續(xù)加溫到80℃-85℃，保溫10-20分鐘后過(guò)濾；

(c)、對(duì)步驟(b)中的過(guò)濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟后獲得肝素鈉產(chǎn)品。

所述的步驟(a)中，還可將將刮制好的小腸粘膜抽入復(fù)頻超聲反應(yīng)罐，復(fù)頻超聲條件為20+40kHZ，選擇超聲強(qiáng)度在0.1W/m2到0.9W/m2。所述的步驟(b)中，所選擇的胰蛋白酶和脂肪酶的優(yōu)選比例為10∶2。所述的步驟(b)中，所選擇保溫酶解的優(yōu)選時(shí)間在2h。復(fù)頻超聲反應(yīng)罐所選擇的超聲強(qiáng)度優(yōu)選為0.3W/m2到0.7W/m2。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1、整個(gè)工序的時(shí)間減少了大概33％；

2、產(chǎn)品的收率提高了29.6％；

3、效價(jià)穩(wěn)定在120以上(國(guó)內(nèi)先進(jìn)技術(shù)產(chǎn)品效價(jià)90-110)。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

制小腸粘膜(10副小腸)，每根小腸與水混合后約4-6公斤，將刮制好的小腸抽入常規(guī)酶解罐，在加溫前先加入2.3-2.8％(體量)的精鹽，調(diào)PH值9.0-9.2；在42℃時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例為10∶2)，占總?cè)芤褐亓勘葹?.4％；繼續(xù)加溫至52℃，保溫3小時(shí)后進(jìn)行酶解，然后繼續(xù)加溫到80℃-85℃，保溫15分鐘后過(guò)濾，對(duì)上述步驟中地過(guò)濾溶液進(jìn)行吸附：吸附水過(guò)濾，冷卻到58℃時(shí)加入樹脂吸附；洗滌：收集樹脂，清水漂洗數(shù)次，再用清水加溫58-60℃，調(diào)PH到7.5，到樹脂洗干凈為止，用1.2N鹽水溶液，調(diào)PH到8加入樹脂中，加溫到60℃，洗滌0.5h，去處洗滌溶液，濾干樹脂；洗脫：用4M的NaCl溶液洗脫2次后，將兩次洗脫溶液合并，過(guò)濾；沉淀：將一、二次洗脫液用85％的乙醇沉淀，體積比例是1∶1.5左右，兌好后的酒精混合液濃度大約是30-40度，沉淀后脫水干燥得肝素鈉產(chǎn)品。

常規(guī)酶解罐內(nèi)鹽解法(國(guó)內(nèi)通用方法)10副小腸可以制得5克肝素鈉。

綜合成本考慮選擇胰蛋白酶和脂肪酶的比例10∶2最優(yōu)，該條件下相比鹽解法產(chǎn)率提高9.4％。

實(shí)施例2

刮制小腸粘膜(10副小腸)，每根小腸與水混合后約4-6公斤，將刮制好的小腸抽入復(fù)頻超聲反應(yīng)器(20+40kHZ)，在加溫前先加入2.3-2.8％(體量)的精鹽，調(diào)PH值9.0-9.2；在42℃時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例為10∶2)，占總?cè)芤褐亓勘葹?.4％；繼續(xù)加溫至52℃，保溫3小時(shí)后進(jìn)行酶解，然后繼續(xù)加溫到80℃-85℃，保溫15分鐘后過(guò)濾，對(duì)過(guò)濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟。

由此可以看出在超聲強(qiáng)度為最優(yōu)為0.5W/m2。

實(shí)施例3

刮制小腸粘膜(10副小腸)，每根小腸與水混合后約4-6公斤，將刮制好的小腸抽入復(fù)頻超聲反應(yīng)器(20+40kHZ)，超聲強(qiáng)度為0.5W/m2，在加溫前先加入2.3-2.8％的精鹽，調(diào)PH值9.0-9.2；在42℃時(shí)加入胰蛋白酶和脂肪酶(比例為10∶2)，占總?cè)芤褐亓勘葹?.4％；繼續(xù)加溫至52℃，保溫不同時(shí)間后進(jìn)行酶解，然后繼續(xù)加溫到80℃-85℃，保溫15分鐘左右后過(guò)濾，對(duì)過(guò)濾溶液進(jìn)行吸附、洗滌、洗脫、沉淀、脫水干燥常規(guī)步驟。

由此可以看出，僅需要2小時(shí)的酶解時(shí)間，相比常規(guī)反應(yīng)器鹽解法在時(shí)間上節(jié)省了大約33％。