[發明專利]抗人DLL4單克隆抗體3F9的制備方法

有效

• 申請號: 201710677649.0
• 申請日: 2017-08-09
• 公開（公告）號: CN107556383B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 金美芳;李剛;周慧婷;汪健;宿廣昊;方芳;謝翌
• 申請（專利權）人: 蘇州大學附屬兒童醫院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N5/20;C12N5/0784;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫周強

本發明公開了抗人DLL4單克隆抗體3F9的制備方法，由雜交瘤細胞株分泌得到，雜交瘤細胞株保藏信息為：保藏單位：中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號；保藏時間：2017年6月7日；保藏號：CGMCC No.14283；分類命名：分泌抗人DLL4分子單克隆抗體雜交瘤細胞株3F9。本發明的單克隆抗體3F9與DC的結合與商品化的克隆MHD4?46相比并不會阻斷DLL4+ DC誘導Na?ve T cells向Th1方向分化的能力。

技術領域

本發明涉及一種單克隆抗體，具體涉及抗人DLL4單克隆抗體3F9的制備方法。

背景技術

Notch信號通路是進化上高度保守的一套信號系統，在細胞增殖、分化和凋亡，以及細胞生長和各種生理功能中均發揮重要作用。Notch信號分子在絕大多數的多細胞生物體內表達。哺乳動物主要表達四種Notch受體（分別為：Notch1、2、3、4）和五種Notch配體（分別為：DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2）。

早期研究顯示，DLL4在血管內皮細胞內高度選擇性表達，對于調控內皮細胞發育至關重要。2004年Amsen及其同事發現通過LPS刺激包含有抗原遞呈細胞的骨髓細胞可以誘導DLL4的表達。2007年，Skokos及其同事報道，CD8-DC通過DLL4分子激活Notch信號通路的方式可以誘導細胞向Th1方向分化，而這種方式是非IL-12依賴性的。隨后有研究表明，在實驗小鼠模型中，DLL4可以調控許多疾病的發病，例如炎癥性疾病、呼吸道病毒感染、實驗性過敏性結腸炎、實驗性自身免疫性腦脊髓炎以及分支桿菌引起的肺肉芽腫。Zhang Yi教授的研究證實了表達DLL4的小鼠樹突狀細胞（dendritic cell, DCs）可以提高自身反應性T細胞的應答并介導移植物抗宿主反應。但是對人DLL4+ DCs的研究還有待進一步開展。

最近，Zhang Yi教授等人的研究報道了人DLL4+ DCs在調節T細胞向Th1和Th17分化中的關鍵作用。來自于健康人的外周血中的CD1C+ DCs和漿細胞樣DC（pDC）表面不表達DLL4分子。相比之下，進行同種異體造血干細胞移植的患者外周血中的DLL4+ CD1C+ DCs表達的DLL4 mRNA水平比健康人高16倍。在激活TLR信號后，來自于健康人的CD1C+ DCs表達的DLL4水平顯著上調。相比之下pDCs上調的程度較低?；罨蟮腄LL4+ DCs比未刺激的DCs能夠更好地促進Th1和Th17分化。在DLL4+ DCs刺激活化T細胞的過程中，使用DLL4的中和抗體來阻斷Notch信號，可以減少Th1和Th17細胞的產生。因此對于人外周血循環的DCs來說，DLL4是其誘導T細胞向Th1和Th17分化的一個重要功能性分子。這些發現為人類炎癥性疾病的治療和干預提供了可能的途徑。

DLL4分子自被發現以來一直被廣大科研工作者所關注，針對人DLL4分子也展開了許多方面的功能性研究。在許多功能性研究中，需要通過抗體標記后使用流式細胞儀將DLL4+的目的細胞分選出來。但目前使用的商品化抗人DLL4單克隆抗體還存在一定的局限性。目前許多知名抗體公司用于流式檢測的抗人DLL4熒光抗體僅有一個克隆號（MHD4-46），而該克隆號的抗體在Zhang Yi教授發表的文獻中明確報道了其具有阻斷DLL4信號的功能。目前并沒有一株商品化的單克隆抗體可用于標記并通過流式細胞儀分選出DLL4+ DCs的同時保留DLL4的信號功能。因此，研制抗人DLL4+功能性單克隆抗體將有助于更好的研究DLL4分子的生物學功能，為研究提供一種新的手段。

發明內容

本發明的發明目的是提供一種抗人DLL4單克隆抗體3F9的制備方法，由抗人DLL4單克隆抗體的雜交瘤細胞株產生。

為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是：

抗人DLL4單克隆抗體3F9的制備方法，所述抗人DLL4單克隆抗體3F9由雜交瘤細胞株制備。