[發(fā)明專利]抗人DLL4單克隆抗體3F9

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710677648.6
• 申請(qǐng)日: 2017-08-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107557343B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李剛;金美芳;周慧婷;汪健;楊純;李曉璐;錢光輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C12N5/0784;C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 孫周強(qiáng)

本發(fā)明公開(kāi)了抗人DLL4單克隆抗體3F9，由雜交瘤細(xì)胞株分泌得到，雜交瘤細(xì)胞株保藏信息為：保藏單位：中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)；保藏時(shí)間：2017年6月7日；保藏號(hào)：CGMCC No.14283；分類命名：分泌抗人DLL4分子單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株3F9。本發(fā)明的單克隆抗體3F9與DC的結(jié)合與商品化的克隆MHD4?46相比并不會(huì)阻斷DLL4+DC誘導(dǎo)Na?ve T cells向Th1方向分化的能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種單克隆抗體，具體涉及抗人DLL4單克隆抗體3F9。

背景技術(shù)

Notch信號(hào)通路是進(jìn)化上高度保守的一套信號(hào)系統(tǒng)，在細(xì)胞增殖、分化和凋亡，以及細(xì)胞生長(zhǎng)和各種生理功能中均發(fā)揮重要作用。Notch信號(hào)分子在絕大多數(shù)的多細(xì)胞生物體內(nèi)表達(dá)。哺乳動(dòng)物主要表達(dá)四種Notch受體（分別為：Notch1、2、3、4）和五種Notch配體（分別為：DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2）。

早期研究顯示，DLL4在血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)高度選擇性表達(dá)，對(duì)于調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)育至關(guān)重要。2004年Amsen及其同事發(fā)現(xiàn)通過(guò)LPS刺激包含有抗原遞呈細(xì)胞的骨髓細(xì)胞可以誘導(dǎo)DLL4的表達(dá)。2007年，Skokos及其同事報(bào)道，CD8-DC通過(guò)DLL4分子激活Notch信號(hào)通路的方式可以誘導(dǎo)細(xì)胞向Th1方向分化，而這種方式是非IL-12依賴性的。隨后有研究表明，在實(shí)驗(yàn)小鼠模型中，DLL4可以調(diào)控許多疾病的發(fā)病，例如炎癥性疾病、呼吸道病毒感染、實(shí)驗(yàn)性過(guò)敏性結(jié)腸炎、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎以及分支桿菌引起的肺肉芽腫。Zhang Yi教授的研究證實(shí)了表達(dá)DLL4的小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell, DCs）可以提高自身反應(yīng)性T細(xì)胞的應(yīng)答并介導(dǎo)移植物抗宿主反應(yīng)。但是對(duì)人DLL4+ DCs的研究還有待進(jìn)一步開(kāi)展。

最近，Zhang Yi教授等人的研究報(bào)道了人DLL4+ DCs在調(diào)節(jié)T細(xì)胞向Th1和Th17分化中的關(guān)鍵作用。來(lái)自于健康人的外周血中的CD1C+ DCs和漿細(xì)胞樣DC（pDC）表面不表達(dá)DLL4分子。相比之下，進(jìn)行同種異體造血干細(xì)胞移植的患者外周血中的DLL4+ CD1C+ DCs表達(dá)的DLL4 mRNA水平比健康人高16倍。在激活TLR信號(hào)后，來(lái)自于健康人的CD1C+ DCs表達(dá)的DLL4水平顯著上調(diào)。相比之下pDCs上調(diào)的程度較低。活化后的DLL4+ DCs比未刺激的DCs能夠更好地促進(jìn)Th1和Th17分化。在DLL4+ DCs刺激活化T細(xì)胞的過(guò)程中，使用DLL4的中和抗體來(lái)阻斷Notch信號(hào)，可以減少Th1和Th17細(xì)胞的產(chǎn)生。因此對(duì)于人外周血循環(huán)的DCs來(lái)說(shuō)，DLL4是其誘導(dǎo)T細(xì)胞向Th1和Th17分化的一個(gè)重要功能性分子。這些發(fā)現(xiàn)為人類炎癥性疾病的治療和干預(yù)提供了可能的途徑。

DLL4分子自被發(fā)現(xiàn)以來(lái)一直被廣大科研工作者所關(guān)注，針對(duì)人DLL4分子也展開(kāi)了許多方面的功能性研究。在許多功能性研究中，需要通過(guò)抗體標(biāo)記后使用流式細(xì)胞儀將DLL4+的目的細(xì)胞分選出來(lái)。但目前使用的商品化抗人DLL4單克隆抗體還存在一定的局限性。目前許多知名抗體公司用于流式檢測(cè)的抗人DLL4熒光抗體僅有一個(gè)克隆號(hào)（MHD4-46），而該克隆號(hào)的抗體在Zhang Yi教授發(fā)表的文獻(xiàn)中明確報(bào)道了其具有阻斷DLL4信號(hào)的功能。目前并沒(méi)有一株商品化的單克隆抗體可用于標(biāo)記并通過(guò)流式細(xì)胞儀分選出DLL4+ DCs的同時(shí)保留DLL4的信號(hào)功能。因此，研制抗人DLL4+功能性單克隆抗體將有助于更好的研究DLL4分子的生物學(xué)功能，為研究提供一種新的手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種抗人DLL4單克隆抗體3F9以及能產(chǎn)生所述抗人DLL4單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種雜交瘤細(xì)胞株，所述雜交瘤細(xì)胞株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC No.14283。

本發(fā)明公開(kāi)的雜交瘤細(xì)胞株的制備方法包括以下步驟：