[發明專利]一種重組犬長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 201710677151.4
• 申請日: 2017-08-09
• 公開（公告）號: CN107266591A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 趙俊;趙雨;高耀輝;戚仕梅;馬騰飛;周煒;陳毅;王亞男
• 申請（專利權）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產業研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/04;C12R1/19
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司34107
• 代理人: 任晨晨

1.一種由犬白細胞介素2與犬干擾素γ組成的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示。

2.一種編碼如權利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，記為基因組1；或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示，記為基因組2。

3.含有如權利要求2所述基因的表達載體。

4.含有如權利要求2所述基因的基因工程菌。

5.一種重組犬長效干擾素γ，其特征在于，所述重組犬長效干擾素γ由權利要求1所述的融合蛋白與凍干保護劑混配之后，經冷凍干燥而成。

6.根據權利要求1所述的融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：將權利要求3所述的表達載體導入到大腸桿菌宿主細胞中，獲得基因工程菌，基因工程菌經IPTG誘導表達后得到所述融合蛋白的粗品，經純化后即可得到融合蛋白。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述基因工程菌為pET-32a/rIL2-IFNγ，其制備方法為：

(1)設計引物，通過反轉錄得到或者人工合成連接有柔性linker序列的犬白細胞介素2和犬干擾素γ的目的基因；通過柔性linker將犬白細胞介素2和犬干擾素γ的目的基因連接起來，目的基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示；

(2)將連接后的目的基因連接到pET-32a質粒上獲得表達載體；

(3)將表達載體導入到大腸桿菌宿主細胞中，即可得到基因工程菌pET-32a/rIL2-IFNγ。

8.根據權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述大腸桿菌宿主細胞為BL21(DE3)感受態細胞或帶有pGro7質粒的BL21(DE3)感受態細胞。

9.根據權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述純化的方法為：融合蛋白的粗品先后經親和層析、陰離子交換層析和分子篩層析純化。

10.根據權利要求5所述的重組犬長效干擾素γ的應用，其特征在于，所述重組犬長效干擾素γ的半衰期長達44小時以上，具有廣譜抗病毒作用并能提高犬自身的免疫應答。