[發(fā)明專利]一種重組犬長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710677151.4
• 申請(qǐng)日: 2017-08-09
• 公開（公告）號(hào): CN107266591A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙俊;趙雨;高耀輝;戚仕梅;馬騰飛;周煒;陳毅;王亞男
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/04;C12R1/19
• 代理公司: 蕪湖安匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司34107
• 代理人: 任晨晨

1.一種由犬白細(xì)胞介素2與犬干擾素γ組成的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示。

2.一種編碼如權(quán)利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，記為基因組1；或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示，記為基因組2。

3.含有如權(quán)利要求2所述基因的表達(dá)載體。

4.含有如權(quán)利要求2所述基因的基因工程菌。

5.一種重組犬長效干擾素γ，其特征在于，所述重組犬長效干擾素γ由權(quán)利要求1所述的融合蛋白與凍干保護(hù)劑混配之后，經(jīng)冷凍干燥而成。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：將權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體導(dǎo)入到大腸桿菌宿主細(xì)胞中，獲得基因工程菌，基因工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后得到所述融合蛋白的粗品，經(jīng)純化后即可得到融合蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述基因工程菌為pET-32a/rIL2-IFNγ，其制備方法為：

(1)設(shè)計(jì)引物，通過反轉(zhuǎn)錄得到或者人工合成連接有柔性linker序列的犬白細(xì)胞介素2和犬干擾素γ的目的基因；通過柔性linker將犬白細(xì)胞介素2和犬干擾素γ的目的基因連接起來，目的基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示；

(2)將連接后的目的基因連接到pET-32a質(zhì)粒上獲得表達(dá)載體；

(3)將表達(dá)載體導(dǎo)入到大腸桿菌宿主細(xì)胞中，即可得到基因工程菌pET-32a/rIL2-IFNγ。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述大腸桿菌宿主細(xì)胞為BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞或帶有pGro7質(zhì)粒的BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述純化的方法為：融合蛋白的粗品先后經(jīng)親和層析、陰離子交換層析和分子篩層析純化。

10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組犬長效干擾素γ的應(yīng)用，其特征在于，所述重組犬長效干擾素γ的半衰期長達(dá)44小時(shí)以上，具有廣譜抗病毒作用并能提高犬自身的免疫應(yīng)答。