[發明專利]DNA條形碼、引物、試劑盒、方法和應用

有效

• 申請號: 201710674993.4
• 申請日: 2017-08-09
• 公開（公告）號: CN109385486B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 田飛;徐平;唐蜀昆;施佳輝;周文婧;高林瑞;高慧英;職曉陽;丁章貴;盧開陽
• 申請（專利權）人: 勐海茶業有限責任公司;云南大益微生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 王靜;丁業平

本發明屬于物種和菌株鑒定領域，具體涉及一種用于鑒別食腺嘌呤節孢酵母菌株的DNA條形碼、引物、試劑盒、方法和應用。該DNA條形碼能夠準確鑒別普洱茶發酵菌株食腺嘌呤節孢酵母TMCC 70007，可以快速準確地將該菌株從易混淆的菌株或同物種內其他菌株中鑒定出來。

技術領域

本發明屬于物種和菌株鑒定領域，具體涉及DNA條形碼、引物、 試劑盒、方法和應用。

背景技術

普洱茶是一種具有云南地理標識的后發酵茶，其采用大葉種曬 青毛茶作為原料，經過一系列工藝制作而成。傳統的普洱茶制作過程 為：采摘的新鮮茶葉經揉捻、曬青、除雜、潮水、渥堆、晾干、篩分、 壓制成型、包裝出廠。在普洱茶的生產中，渥堆發酵過程是普洱茶品 質形成的主要因素，在此過程中，茶葉中諸如茶多酚、咖啡因以及一 些多糖物質等內含成分發生了巨大變化，成就了普洱茶的特殊風味、 口感、品質以及各種保健功效。

傳統的普洱生產中，濕熱的環境激活茶葉本身所含的酶，把茶 葉中所含的一部分內含成分轉化成微生物能利用的物質，微生物大量 滋生，產生豐富的胞內酶和胞外酶，催化茶葉中包含的成分發生一系 列轉變，再加上濕熱等其他因素，逐漸形成不同品質的普洱茶。不同 的產地，因為其微生物群落結構的不同，風味及品質也各具特色。

普洱茶除了其獨特的風味和文化外，其諸如減肥、降血糖血脂、 預防和改善心血管疾病、抗衰老、抗癌、消炎、助消化以及養胃等保 健功效也備受人們關注。近年來，普洱茶越來越受歡迎，逐漸增加的 市場需求拉動了普洱茶產業的發展，促進了云南地區經濟增長。

然而，普洱茶也面臨著一些困境，例如產品質量不穩定、存在一 定安全隱患、生產周期長、勞動力投入過高、微生物數量超標和螨蟲 滋生等。隨著人們生活水平的提高，消費者對食品的衛生、安全等問 題日益重視。近幾年食品質量安全事件頻發，茶葉質量的安全問題也 日益突出，除了農藥的殘留問題之外，渥堆發酵過程中微生物也有可 能成為影響茶葉質量的重要因素。

目前多數廠家的普洱茶生產仍然是半自然人工渥堆的經驗式發 酵，雖然渥堆過程中以食腺嘌呤節孢酵母(Blastobotrys adeninivorans) 等優勢共性微生物為主的群落相對穩定，但產品的穩定性還存在較大 的提升空間。生產過程中也不可避免的存在著一定的安全隱患，為了 進一步獲得消費者的青睞和市場的認可、突破外貿壁壘、提升普洱茶 企業的市場競爭力，必須實現普洱茶生產工藝的人工可控化、清潔化 以及高效化，并不斷開發新產品、延伸產業鏈。要做到這些，就必須 革新技術，發明一系列安全、清潔、高效、人工可控自動化的普洱茶 新工藝，才能確保普洱茶產業的健康發展，給國家和人民帶來長遠利益。

隨著普洱茶科研的進一步深入，越來越多的人們開始了人工接 種發酵普洱茶的探索，目前已經有許多菌株應用于普洱茶人工可控發 酵。近年由于市場需求加大，許多規模較小的廠家對普洱茶缺乏系統 深入的研究，大肆濫用許多他人專利進行牟利，比如，按照一些接種 發酵普洱茶的專利方法，采用一些菌種進行普洱茶發酵等一系列方 法，進行普洱茶加工生產等經營活動，大大損害了一些具有相關專利 的普洱茶生產企業的經濟利益。

為確保普洱茶發酵微生物種質資源得到有效保護，防止濫用普 洱茶發酵微生物的侵權行為發生，解決在普洱茶人工可控發酵過程中 菌種侵權時難以舉證的難題，開發對普洱茶發酵用菌株進行快速精準 鑒別的方法勢在必行，亟需建立其分子鑒定方法，開發通過DNA條 形碼技術準確鑒別與區分與其相似菌株的方法，以達到通過形態特征 與分子數據分析相結合的方法來解決工業生產菌株鑒別和鑒定問題， 為普洱茶有控工業發酵工藝開發和資源保護提供理論依據，促進普洱 茶產業健康繁榮發展。

發明內容