[發(fā)明專(zhuān)利]含有35個(gè)人類(lèi)Y?STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710674764.2
• 申請(qǐng)日: 2017-08-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107653324A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋玉軍;李航;李靜
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽安龍基因科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 杭州君度專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)33240
• 代理人: 王桂名

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種含有35個(gè)人類(lèi)Y-STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

人類(lèi)Y染色體屬于性染色體，為正常男性所特有，其在遺傳過(guò)程中不發(fā)生重組，其序列結(jié)構(gòu)除突變外由父代不變的傳遞給子代，同一父系人群的Y染色體在理論上相同，而Y染色體的這一特性，使其在實(shí)際辦案中，對(duì)性侵犯、傷害等案件中提取到的男女混合檢材進(jìn)行鑒定時(shí)，由于男性個(gè)體Y染色體遺傳信息同時(shí)不受女性成分影響，Y染色體長(zhǎng)期以來(lái)都是作為重要的研究檢驗(yàn)對(duì)象被應(yīng)用于法醫(yī)物證檢驗(yàn)。

短串聯(lián)重復(fù)序列(STR,short tandemrepeats)擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)是目前應(yīng)用最廣泛、技術(shù)最成熟的Y染色體遺傳信息檢驗(yàn)技術(shù)，基于這一技術(shù)而開(kāi)發(fā)的各種商業(yè)化試劑盒，應(yīng)用較廣的有Promega和ABI公司推出的Y-STR試劑盒，其主要是按照歐洲人群統(tǒng)計(jì)選擇的基因座位點(diǎn)，不少基因座的多態(tài)性在中國(guó)人群中比較低，如在中國(guó)人群中多態(tài)性小于加之基因座數(shù)量少，造成了系統(tǒng)整體個(gè)體識(shí)別能力低，在法醫(yī)鑒定的實(shí)際應(yīng)用中有時(shí)會(huì)遇到瓶頸，特別是近年隨著數(shù)據(jù)庫(kù)的發(fā)展，比對(duì)樣本基數(shù)的增加，Y-STR作為家系排查的主要比對(duì)指標(biāo)，現(xiàn)有Y-STR檢測(cè)系統(tǒng)識(shí)別率不足的缺點(diǎn)日益突出，或者由于Y-STR突變，造成家系比對(duì)無(wú)法確定或誤判的情況。

因此，開(kāi)發(fā)一種針對(duì)中國(guó)人群的基因座數(shù)量多、多態(tài)性高、性能穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)單和能同時(shí)檢測(cè)更多基因座的Y-STR檢測(cè)體系，成為我國(guó)法醫(yī)物證檢驗(yàn)鑒定的迫切需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的性能不穩(wěn)定、操作復(fù)雜的缺陷，提供一種含有35個(gè)人類(lèi)Y-STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒來(lái)解決上述問(wèn)題。

本發(fā)明公開(kāi)了一種含有35個(gè)人類(lèi)Y-STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒，其特點(diǎn)在于：所述的基因座為DYS458、DYS460、DYS437、DYS439、DYS481、DYS385a/b、 DYS557a/b、DYS456、DYS391、DYS390、DYS635、DYS19、GATA_H4、DYS447、 DYS438、DYS389I、DYS448、DYS389II、DYS387、DYS518、DYS393、DYS576、DYS570、DYS392、DYS449、DYS527a/b、DYS444、DYS388、DYS643、SYS533、DYS549、DYS627。

作為優(yōu)選，針對(duì)上述35個(gè)Y-STR基因座，在其重復(fù)序列的側(cè)翼分別設(shè)計(jì)特異性熒光標(biāo)記引物。

作為優(yōu)選，所述的35個(gè)Y-STR基因座的引物序列如下表

作為優(yōu)選，所述的35對(duì)Y-STR基因座的特異性擴(kuò)増引物分為五組：

第一組：DYS458、DYS460、DYS437、DYS439、DYS481、DYS385a/b、DYS557 a/b；

第二組：DYS456、DYS391、DYS390、DYS635、DYS19、GATA_H4、DYS447；

第三組：DYS438、DYS389I、DYS448、DYS389II、DYS387、DYS518；

第四組：DYS393、DYS576、DYS570、DYS392、DYS449、DYS527a/b；

第五組：DYS444、DYS388、DYS643、SYS533、DYS549、DYS627。

將五組特異性擴(kuò)増引物分別用藍(lán)色FAM、綠色VIC、黃色NED、紅色PET、和粉色熒光素HEX標(biāo)記其5'端。試劑盒內(nèi)設(shè)有內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)由一組大小固定且不同的DNA片段組成，內(nèi)標(biāo)用SIZ橙色熒光標(biāo)記物。

作為優(yōu)選，所述的含有35個(gè)人類(lèi)Y-STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒包括反應(yīng)混合液、35對(duì)STR基因座的特異性擴(kuò)増引物、35個(gè)基因座的等位基因、熱啟動(dòng)Taq酶、DNA標(biāo)準(zhǔn)品、sdH20和熒光分子量?jī)?nèi)標(biāo)。

作為優(yōu)選，所述的含有35個(gè)人類(lèi)Y-STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒的具體成分為：

作為優(yōu)選，所述的含有35個(gè)人類(lèi)Y-STR基于座的復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒的擴(kuò)增反應(yīng)體系為：

反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃1min；94℃1min，60℃1min，72℃1min，共29 個(gè)循環(huán)；72℃10min。

本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明提供了