[發明專利]編碼GPC?3嵌合抗原受體蛋白的核酸及表達GPC?3嵌合抗原受體蛋白的T淋巴細胞

在審

• 申請號: 201710672717.4
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN107460201A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 李宗海;高慧萍;蔣華;石必枝;王華茂;李克桑;王紅陽;楊勝利;顧健人
• 申請（專利權）人: 科濟生物醫藥（上海）有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 崔佳佳,馬莉華

1.編碼表達于人T淋巴細胞表面的抗GPC3嵌合抗原受體蛋白的核酸，所述抗GPC3嵌合抗原受體蛋白包含順序連接的胞外結合區，跨膜區和胞內信號區，其中所述胞外結合區包含特異性識別GPC3的C末端表位的單鏈抗體scFv(GPC3)，所述胞外結合區的氨基酸序列具有SEQ ID NO:22～25任一序列的第1-113位所示的輕鏈可變區以及SEQ ID NO:22～25任一序列的第129-243位所示的重鏈可變區。

2.如權利要求1所述的核酸，其特征在于，所述的胞外結合區的氨基酸序列具有SEQ ID NO:22～25任一序列的第1-243位所示的單鏈抗體的序列。

3.如權利要求1或2所述的核酸，其特征在于，所述跨膜區選自包含CD8或CD28的跨膜區和鉸鏈區的序列。

4.如權利要求1-3任一所述的核酸，其特征在于，所述胞內信號區選自CD3ζ，FcεRIγ，CD28，CD137，CD134的胞內信號區序列，及其組合。

5.如權利要求1-4任一所述的核酸，其特征在于，所述嵌合抗原受體蛋白是選自包含順序連接的胞外結合區，跨膜區和胞內信號區的如下順序連接的嵌合抗原受體蛋白：

scFv(GPC3)-CD8-CD3ζ，

scFv(GPC3)-CD8-CD137-CD3ζ，

scFv(GPC3)-CD28a-CD28b-CD3ζ，

scFv(GPC3)-CD28a-CD28b-CD137-CD3ζ，

及其組合，其中相關嵌合抗原受體蛋白中CD28a代表CD28分子的跨膜區，CD28b代表CD28分子的胞內信號區。

6.如權利要求1的核酸，其特征在于，所述核酸選自編碼具有SEQ ID NO:22～25之一序列的嵌合抗原受體蛋白的核酸。

7.如權利要求6所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有SEQ ID NO:18-21之一的序列。

8.如權利要求1所述的核酸，其特征在于，所述核酸為與權利要求7所述的核酸具有至少50％、70％、80％、90％、或95％相同性的多核苷酸。

9.如權利要求8所述的核酸，其特征在于，所述核酸編碼的多肽與SEQ ID NO:22-25之一所示的成熟多肽有相當的生物學功能和活性。

10.包含權利要求1-9之一所述的核酸的載體。

11.權利要求10所述的載體，該載體來自慢病毒質粒pWPT-eGFP，并具有如SEQ ID NO:27-30之一的核酸序列。

12.包含權利要求10或11所述載體的病毒。

13.一種基因修飾的T淋巴細胞，其被轉導有權利要求1-9之一的核酸或權利要求10或11所述的載體或權利要求12所述的病毒。

14.一種轉基因T淋巴細胞，其表面表達一種嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體由SEQ ID NO:18-21之一的核酸編碼表達。

15.一種基因修飾的T淋巴細胞，其表面表達一種嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體的氨基酸序列選自SEQ ID NO:22-25之一。