[發明專利]一種集成黃曲霉毒素光衍生化器的熒光檢測器

有效

• 申請號: 201710669915.5
• 申請日: 2017-08-08
• 公開（公告）號: CN109387592B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 耿旭輝;關亞風;高巖;寧海靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/02;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發明一種集成黃曲霉毒素光衍生化器的熒光檢測器，將光衍生化器和熒光檢測器集成為一體，衍生反應池同時也是熒光檢測池。這樣可以有效地減小了“一半”的柱后體積，降低峰展寬、增加分離度、并提高了靈敏度。使用大功率紫外LED同時作為衍生光源和激發光源；內徑1?4mm石英管同時作為衍生池和檢測池；采用正交式、20?70°熒光收集光路；13μL衍生池體積就能得到傳統光衍生化器1000μL池體積的衍生效率，大幅降低了譜帶展寬，出峰時間更短、節省了分析時間，而且更簡單、實用、大幅降低了成本和體積。

技術領域

本發明專利涉及高效液相色譜(HPLC)、流動注射分析(FIA)的光化學衍生和熒光檢測領域，更具體地說，涉及一種集成黃曲霉毒素光衍生化器的熒光檢測器。

背景技術

光衍生化器廣泛地用于高效液相色譜(HPLC)-熒光檢測法定量檢測黃曲霉毒素和磺胺類藥物，用于選擇性增強黃曲霉毒素B1、G1和磺胺類藥物如磺胺嘧啶等的熒光強度。在眾多的黃曲霉毒素檢測方法中，提出最早的也是目前應用最為廣泛的方法是高效液相色譜-熒光檢測(HPLC-FLD)法，如國家標準GB/T 18979-2003和GB/T 23212-2008。

黃曲霉毒素B1和G1本來具有較強的熒光，但其與水接觸后，會有熒光淬滅現象發生，熒光變得很弱，所以一般用衍生方法來提高它們的熒光強度。目前主流衍生方法為碘/溴衍生法和光化學衍生法。碘衍生法要配制碘液，還要額外配衍生液輸液泵，增加了成本。而光化學衍生法操作簡單，只需將光衍生化器串聯在色譜柱與熒光檢測器之間即可，無需使用化學物質，也不需要輔助輸液泵，無需沖洗步驟。因此，2015年中國藥典也將光衍生化器添加至黃曲霉毒素測定法一章中，用來輔助測定藥材、飲片和制劑中的痕量黃曲霉毒素。

但是，至今所用的黃曲霉毒素光衍生化器，不論是科研用的還是商品化的，其光源都是采用波長為254nm低壓汞燈，壽命為2000～3000小時。發射光強隨著光源點亮時間的增加而逐漸衰減，光衍生效率隨之降低。光衍生化器所用的反應管是高透明FEP管，長度10～12米，采用密集編織的環套結構形成一個長方形的網，這種結構使流過的液體獲得良好的混合，同時又盡可能降低譜帶展寬。但是編制這樣的一個環套結構的網是用手工編制，費時費力。一臺商品化光化學衍生器的價格在3～4萬元人民幣。目前的光衍生化器存在光源壽命短、衍生管編織制作復雜、體積大、價格昂貴等缺點。針對此，我們課題組使用紫外LED為衍生光源、簡單的小體積衍生池，分別研發出了“一種黃曲霉毒素和磺胺類藥物的光衍生化器”，發明專利申請號：201610808871.5和“一種黃曲霉毒素和磺胺類藥物的芯片式光衍生化器”，發明專利申請號：201611038988.6。光衍生化器和檢測器分離，二者相互獨立、互不干擾，光衍生化器可串聯任意熒光檢測器，這是其優點。但是，二者分離連接終究還是增加了一部分柱后體積，會稍有增加峰展寬、減小分離度和降低靈敏度。

發明內容

針對上述問題，為了改進現有技術的不足，基于對光化學衍生反應和熒光檢測的進一步深入研究，本發明提出將光衍生化器和熒光檢測器集成為一體，衍生反應池同時也是熒光檢測池。這樣可以有效地減小了“一半”的柱后體積，降低峰展寬、增加分離度、并提高了靈敏度。擬使用大功率紫外LED同時作為衍生光源和激發光源，用激發濾光片濾光；內徑1-4mm石英管同時作為衍生池和檢測池；采用正交式、20-70°熒光收集光路，雙凸收集透鏡收集熒光，發射濾光片濾除雜散光，最后由光電探測器檢測熒光；上述措施同時優化了光衍生化器參數和熒光檢測器參數，和商用熒光檢測器相比，有效地大幅度提高了檢測信噪比，降低了檢測限。

本發明的技術方案是：