[發明專利]一種血清IgG的Gal指標在結核病診斷中的應用

在審

• 申請號: 201710668063.8
• 申請日: 2017-08-07
• 公開（公告）號: CN107478712A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 章曉聯
• 申請（專利權）人: 章曉聯
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙)42222
• 代理人: 彭勁松

技術領域

本發明屬于結核病的診斷領域，具體涉及一種通過測定血清樣品中免疫球蛋白G(IgG))N糖鏈末端半乳糖對結核病人進行血清學診斷的診斷工具及其輔助診斷以提高檢出率，特別是顯著提高菌陰結核病人診斷檢出率中的應用。

背景技術

結核病是一種嚴重危害人類和動物健康的慢性傳染病，結核分枝桿菌所致結核病是人畜共患的結核病。全球目前有近三分之一的人感染結核分枝桿菌，據WHO《2016全球結核報告》估計2015年新發結核病例1040萬例，其中僅有約610萬人被檢測發現，因結核病死亡人數達140萬，超過其它傳染病死亡人數的總和。

早期以及明確的診斷對結核治療、預后以及傳播的控制有著極其重要的意義。目前臨床上應用的結核病診斷技術主要有結核菌素(PPD)試驗、痰細菌培養、抗酸染色、血清學抗體檢測、PCR、IFN-的ELISpot檢測及基因芯片等方法，在臨床應用中均存在或多或少的局限性，如，PPD試驗的假陽性率高；PCR無法區分菌體的活動狀態；而ELISpot及基因芯片操作繁瑣成本較高，樣本收集需要新鮮全血細胞，較困難；抗體的檢測不能區分窗口期感染、現行感染與既往感染；痰培養的方法周期長、易污染；抗酸染色的方法靈敏度低，檢出率低。因此，亟待開發新型的、有效的結核診斷試劑及結核病藥物制劑對結核病的防治具有重要意義。肺結核診斷的金標準是痰涂片和(或)培養結核菌陽性，但痰涂片檢出率或敏感性僅為30-60％，因此痰涂片和(或)培養陰性的菌陰結核病是實驗室最為常見的難以診斷的結核病(陸再英，鐘南山。內科學。第7版。北京：人民衛生出版社，2008：49)。目前菌陰結核病診斷沒有相應的診斷分子標識，大多數菌陰結核診斷僅僅依據臨床癥狀，結合影像學檢測、T-SPOT等檢測結果確診，因此菌陰結核嚴重缺乏有效的實驗室診斷手段(Siddiqi K,Lambert ML,Walley J.Clinical diagnosis of smear-negative pulmonary tuberculosis in low-income countries:the current evidence.Lancet Infect Dis.2003 May；3(5):288-96)。

發明內容

本發明的目的在于提出血清IgG表面雙天線復雜型N糖鏈的末端半乳糖基化程度(具體為N糖鏈末端去半乳糖(Gal₀)與半乳糖糖鏈(Gal₁和Gal ₂)豐度的比值，IgG Gal-ratio)可作為結核病的診斷標志，并具體提出用于特異性檢測該標志物的試劑在制備用于結核病的診斷的診斷工具中的應用；本發明所提出的結核病的診斷標志的水平與結核病的發生密切相關，可用于結核病的診斷，進而用于指導結核病的治療。

為了實現上述目的本發明采用的技術方案是：

在本發明的第一方面中，提供了一種特異性檢測血清IgG雙天線復雜型N糖鏈的末端半乳糖基化程度的試劑在制備用于結核病，特別是用于菌陰結核病的輔助診斷工具中的應用。

作為優選，通過基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜檢測血清IgG N-糖鏈雙天線末端無半乳糖的質譜峰峰高Gal₀、末端連有1個半乳糖的質譜峰峰高Gal₁和末端連有2個半乳糖的質譜峰峰高Gal₂；

通過以下公式，獲得Gal-ratio：

Gal-ratio＝Gal₀/(Gal₁+Gal₂×2)，

每個血清樣本平行質譜檢測3次，取3次質譜峰高均值，代入上述Gal-ratio計算公式中，最終得到Gal-ratio值，將其與相同檢測條件下的正常個體的血清IgG的Gal-ratio相比的增高，診斷為患有疑似結核病。

作為優選，所述結核病為結核分枝桿菌或耐藥結核分枝桿菌導致的結核病，包括所有人畜共患的結核病。

作為優選，(i)用于結核病診斷：當Gal-ratio值達到或高于0.3668，則提示對象患結核??；

(ii)用于痰涂片陰性結核(AFS^-)人群診斷：當Gal-ratio值達到或高于0.3668，則提示對象患結核病；

(iii)用于痰涂片陽性結核(AFS⁺)人群診斷：當Gal-ratio值達到或高于0.4582，則提示對象患結核病；