[發(fā)明專利]一種抗腫瘤環(huán)肽及其制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710667566.3
• 申請日: 2017-08-07
• 公開（公告）號(hào): CN107474117B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張娜;唐珊;汪楊俊琦;齊曉倩;趙麗嬌;鐘儒剛
• 申請（專利權(quán)）人: 北京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/64
• 分類號(hào): C07K7/64;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/14;A61K38/12;A61P35/00
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

一種抗腫瘤環(huán)肽及其制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用，屬于生物制藥領(lǐng)域?？鼓[瘤環(huán)肽，其氨基酸序列為其中兩個(gè)Cys形成二硫鍵，分子量為1442.71。本發(fā)明還涉及包含該抗腫瘤環(huán)肽的組合物、及其制備方法和醫(yī)藥用途。抗腫瘤活性測試表明，本發(fā)明的抗腫瘤環(huán)肽對腫瘤細(xì)胞如肝癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞的增殖抑制效果顯著，并具有明顯的促凋亡作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種抗腫瘤環(huán)肽及其制備方法和醫(yī)藥應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，利用現(xiàn)代生物技術(shù)合成的多肽藥物已成為藥物研發(fā)的熱點(diǎn)之一，其因適應(yīng)證廣、安全性高且療效顯著，目前已應(yīng)用于腫瘤等相關(guān)重大疾病的預(yù)防、診斷和治療，具有廣闊的開發(fā)前景。

隨著多肽藥物成為研發(fā)現(xiàn)代藥物不可或缺的重要領(lǐng)域之一，其發(fā)展也越來越快。目前已經(jīng)有超過300種多肽藥物進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，有超過600種多肽藥物正在臨床前試驗(yàn)中，并有超過60種多肽藥物上市，包括用于治療腫瘤的多肽藥物，如用于治療可切除的骨髓瘤的Mepect、用于治療皮膚T細(xì)胞淋巴瘤的Istodax和用于治療CD30陽性霍奇金淋巴瘤的Adcetris等。多肽藥物分子結(jié)構(gòu)小、易改造、易合成，且生產(chǎn)過程中排放的廢物少，屬于綠色制藥，因此多肽藥物是21世紀(jì)最有發(fā)展前途的藥物之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種抗腫瘤環(huán)肽，所述抗腫瘤環(huán)肽的氨基酸序列為其中兩個(gè)Cys形成二硫鍵。

該抗腫瘤環(huán)肽的分子量為1442.71，可以通過反相高效液相色譜法進(jìn)行純化，并且通過該方式純化可以使其純度達(dá)到96.78％。

本發(fā)明提供了一種抗腫瘤組合物，所述抗腫瘤組合物包含本發(fā)明所述的抗腫瘤環(huán)肽。

本發(fā)明進(jìn)一步公開了所述抗腫瘤環(huán)肽的制備方法，所本發(fā)明采用固相合成法來制備所述抗腫瘤環(huán)肽。所述固相合成法可通過以下措施達(dá)到：

采取Fmoc方案，選取CTC高分子樹脂，將所述抗腫瘤環(huán)肽C端即羧基端的Fmoc-Gly-OH以共價(jià)鍵形式連接到CTC樹脂上，脫掉Fmoc保護(hù)基團(tuán)，以結(jié)合在高分子樹脂上的Gly的氨基作為合成起點(diǎn)，按照所述抗腫瘤環(huán)肽從C端即羧基端到N端即氨基端的氨基酸序列CGHFKFGYLRCG的順序，分別依次進(jìn)行縮合反應(yīng)形成肽鍵，脫Fmoc保護(hù)，縮合形成肽鍵，不斷重復(fù)循環(huán)這個(gè)步驟，直到序列全部偶聯(lián)完全，脫Fmoc保護(hù)；之后，用甲醇切割樹脂得到多肽粗品，利用反相高效液相色譜法進(jìn)一步純化，經(jīng)過處理使兩個(gè)Cys形成二硫鍵成環(huán)；再用反相高效液相色譜法純化得到純度高達(dá)96.78％的目標(biāo)環(huán)肽。

本發(fā)明提供了所述抗腫瘤環(huán)肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述腫瘤選自肝癌、宮頸癌以及肺癌。所述抗腫瘤環(huán)肽在5-500μM濃度范圍內(nèi)對肝癌細(xì)胞HepG-2和宮頸癌細(xì)胞Hela的增殖抑制率分別為2.6％-100％和3.9％-99.9％，所述抗腫瘤環(huán)肽在9-900μM濃度范圍內(nèi)對肺癌細(xì)胞A549的增殖抑制率為16.5％-99.3％，其IC₅₀值分別為36.90μM,61.41μM,39.87μM。

本發(fā)明提供了所述抗腫瘤環(huán)肽在制備用于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡藥物中的應(yīng)用。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤細(xì)胞選自肝癌細(xì)胞、宮頸癌細(xì)胞以及肺癌細(xì)胞。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述腫瘤細(xì)胞為肺癌細(xì)胞。所述抗腫瘤環(huán)肽濃度為40μM時(shí)，對肺癌細(xì)胞A549的促凋亡率為40.49％。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下的優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果：本發(fā)明首次合成了該抗腫瘤環(huán)肽，并且采用CCK-8方法測定了該環(huán)肽的抗腫瘤活性，所述抗腫瘤環(huán)肽具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。此外，本發(fā)明人還采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測了該環(huán)肽對腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所述抗腫瘤環(huán)肽對腫瘤細(xì)胞具有顯著的促凋亡作用。

附圖說明

圖1抗腫瘤環(huán)肽的HPLC圖。