[發明專利]一種基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法

在審

• 申請號: 201710664904.8
• 申請日: 2017-08-07
• 公開（公告）號: CN107765000A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 田宏;鄭海學;楊帆;吳錦艷;張克山;朱紫祥;劉湘濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 王新生

1.一種基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、將protein G作為親和配基偶聯到磁珠上，得到protein G免疫磁珠，所述protein G免疫磁珠通過親和層析與O型口蹄疫病毒單克隆抗體進行偶聯，得到富集口蹄疫病毒的特異性免疫磁珠；

步驟二、使用所述富集口蹄疫病毒的特異性免疫磁珠對口蹄疫病毒懸液進行吸附，以富集口蹄疫病毒；以及

步驟三、檢測所述富集口蹄疫病毒的特異性免疫磁珠對口蹄疫病毒的富集效率。

2.如權利要求1所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述protein G免疫磁珠通過親和層析與O型口蹄疫病毒單克隆抗體進行偶聯的最大偶聯量為1.5mg protein G免疫磁珠結合80μg O型口蹄疫病毒單克隆抗體。

3.如權利要求1所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述步驟二具體為：

將一定量的所述富集口蹄疫病毒的特異性免疫磁珠與一定體積的口蹄疫病毒懸液進行混合，并在室溫下孵育2h。

4.如權利要求1所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述步驟三具體為：

富集完成后，提取所述富集口蹄疫病毒的特異性免疫磁珠中O型口蹄疫病毒RNA，通過一步法熒光定量RT-PCR檢測富集的O型口蹄疫病毒拷貝數，并計算O型口蹄疫病毒的富集效率。

5.如權利要求1所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述步驟一中，protein G免疫磁珠的制備方法為：

S1、向離心管中加入一定量的Dynabeads磁珠，并放置到磁力架上，棄去所述離心管內的上清液，然后向離心管中加入IgG，進行室溫渦旋以混勻，將渦旋后的離心管置于磁力架上，并棄去上清液，加入PBST進行渦旋沉淀；

S2、向渦旋沉淀后的離心管中加入BSA封閉液，進行渦旋并混勻后，于室溫下將離心管置于混勻器上進行混勻；

S3、將混勻后的離心管置于磁力架上，棄去上層封閉液后，向下層沉淀中加入PBS緩沖液于磁力架上對磁珠進行洗滌，洗滌3次后加入一定體積的PBS緩沖液進行重懸磁珠，得到protein G免疫磁珠，并在4℃進行保存。

6.如權利要求5所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述IgG的濃度為0.1μg/μL。

7.如權利要求5所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述BSA封閉液為1％的BSA封閉液。

8.如權利要求5所述的基于免疫磁珠特異性富集O型口蹄疫病毒的方法，其特征在于，所述S2中，所述離心管置于混勻器上進行1-2h的混勻。