[發(fā)明專利]一種油茶脂肪酸快速甲酯化的方法

在審

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• 申請日: 2017-08-04
• 公開（公告）號: CN107389839A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張琳;劉美蘭;趙廣;何瀟;張偉健;龍洪旭;譚曉風(fēng)
• 申請（專利權(quán)）人: 中南林業(yè)科技大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 長沙市融智專利事務(wù)所43114
• 代理人: 袁靖

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于油茶脂肪酸的分析方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種油茶脂肪酸快速甲酯化方法。

背景技術(shù)

油茶(Camellia oleifera)是我國特有的木本食用油料樹種，在我國林業(yè)產(chǎn)業(yè)建設(shè)、生態(tài)建設(shè)、食用植物油安全保障及國民健康水平提高等方面具有非常重要的作用。黨和政府十分重視油茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，把發(fā)展油茶等木本油料產(chǎn)業(yè)作為緩解我國食用植物油安全的重要途徑。茶油不飽和脂肪酸含量高達(dá)90％以上，油酸含量約80％，還含有角鯊烯等稀有保健成分，茶油和橄欖油被聯(lián)合國糧農(nóng)組織推薦為最佳食用植物油，長期食用茶油有利于提高國民的健康水平。但是茶油中α-亞麻酸的含量僅為0.3％-0.4％，α-亞麻酸是只在植物體內(nèi)合成的三價不飽和脂肪酸，是n-3多不飽和脂肪酸中唯一的人體必需的脂肪酸，在人體中不能自身合成，必須從食物中攝取，它具有降血脂血壓、預(yù)防心腦血管疾病、增強(qiáng)智力等多方面的功能和作用。同時還發(fā)現(xiàn)，油茶產(chǎn)業(yè)普遍存在著單位面積產(chǎn)量低和經(jīng)濟(jì)效益差兩大問題，中國共有油茶林4531.2萬畝，年產(chǎn)茶油僅20多萬噸，平均畝產(chǎn)茶油僅5.8kg，主要原因是良種化程度低，品種混亂，以及油茶炭疽病等重要病害影響生長發(fā)育。因此，可以通過油茶遺傳轉(zhuǎn)化體系，利用分子設(shè)計育種改善茶油性質(zhì)而獲得高含量的α-亞麻酸油茶植株或者改善油茶抗病能力而獲得抗病植株，對于進(jìn)一步提高茶油的保健品質(zhì)和油茶植株的抗病能力具有重大的科學(xué)意義和產(chǎn)業(yè)開發(fā)價值。

對油茶油脂發(fā)育過程中脂肪酸的檢測是改善茶油品質(zhì)和提高茶油產(chǎn)量的重要工作；而植物的抗病能力與葉片脂肪酸密切相關(guān)。就前期的研究來看，油茶脂肪酸常規(guī)檢測工作首先都要利用石油醚浸染和索式抽提儀器將油脂抽提出來，或者利用壓榨技術(shù)提取油脂，之后，再進(jìn)行脂肪酸甲酯化檢測。這種常規(guī)檢測工作所需樣品量大，成本高，耗時長，操作復(fù)雜，不能對油脂含量低而無法提取油脂的油茶種仁、葉片或愈傷組織等材料進(jìn)行檢測，進(jìn)而影響對油茶的種仁發(fā)育及油茶遺傳轉(zhuǎn)化的篩選。因此，非常需要一種無需提取油脂，且樣品用量少，耗時少，操作簡單的脂肪酸甲酯化檢測方法，更為精確的檢測油茶種仁油脂發(fā)育過程的變化，為茶油品質(zhì)的改善提供重要依據(jù)；同時，應(yīng)用這種方法不僅可以對實生苗或組培苗葉片脂肪酸進(jìn)行檢測，而且還可以對早期遺傳轉(zhuǎn)化體系獲得的愈傷組織、葉片進(jìn)行表型檢測，大大減少了油茶遺傳轉(zhuǎn)化工作，這為油茶的轉(zhuǎn)基因研究提供了一種重要技術(shù)手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種免去繁瑣的油脂提取步驟，而且原料用量很少，反應(yīng)更為快速的脂肪酸甲酯化方法，該方法處理原料得到的產(chǎn)物完全不影響對油茶脂肪酸甲酯進(jìn)行定性定量分析和檢測。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種油茶脂肪酸快速甲酯化方法，將氫氧化鈉-甲醇溶液加入油茶粉末樣品中，混合均勻后靜置，用正庚烷將油茶脂肪酸甲酯化，完成反應(yīng)。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：粉末樣品的用量為0.01-0.1g，優(yōu)選0.05-0.1g。。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：所述的油茶粉末樣品包括種仁、葉片或者愈傷組織，樣品粉碎至50～100目。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：氫氧化鈉-甲醇溶液的加入比例為5-10ml氫氧化鈉-甲醇溶液/0.1g末樣品，優(yōu)選5ml氫氧化鈉-甲醇溶液/0.1g粉末樣品。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：甲醇溶液中氫氧化鈉的質(zhì)量百分比為5-15％。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：甲醇溶液中氫氧化鈉的質(zhì)量百分比優(yōu)選為8-12％，進(jìn)一步優(yōu)選為10％。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：混合均勻后靜置反應(yīng)10-60min，優(yōu)選30分鐘。

所述的油茶脂肪酸快速甲酯化方法：按照0.1g粉末樣品/5ml-10ml正庚烷的比例，進(jìn)行甲酯化，1-10min完成反應(yīng)，優(yōu)選2-10min，進(jìn)一步優(yōu)選5min。

本發(fā)明使用微量的樣品粉末，在堿催化下直接用甲醇進(jìn)行萃取，用正庚烷甲酯化，獲取脂肪酸甲酯可用于氣相色譜等分析。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點：

1、樣品使用量少，0.01-0.1g粉末即可檢測；

2、無需提取茶油，減少了操作步驟；

3、操作簡單，大大的減少了成本；

4、利用堿化甲醇浸染提高反應(yīng)速度和脂肪酸甲酯化率的要求；

5、縮短樣品甲酯化時間，50min左右完成檢測大大的節(jié)省了時間成本。