[發明專利]一種黃疸、溶血、脂血的血清處理方法

有效

• 申請號: 201710660380.5
• 申請日: 2017-08-04
• 公開（公告）號: CN107478477B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 丁友玲;李紅玲;陳曉佳
• 申請（專利權）人: 福州新北生化工業有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供一種黃疸、溶血、脂血的血清處理方法，取血清100μL加入120μL 0.2moL/L高氯酸+80μL 0.1moL/L冰醋酸，混勻后在37℃水浴10min，接著加入200μL 0.25moL/LNaOH及500μL 0.2moL/L磷酸鹽緩沖液，接著通過細菌內毒素檢測試劑盒測定內毒素含量。本發明處理液法成分含高氯酸，冰醋酸，氫氧化鈉，檢測程序上添加磷酸鹽緩沖液，增強穩定性，用于黃疸、溶血、脂血樣本，有效克服膽紅素、血紅蛋白或甘油三脂的干擾，提高回收率。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種黃疸、溶血、脂血的血清處理方法。

背景技術

2015年版《中國藥典》規定用的“細菌內毒素檢查法”檢測藥品的熱原的品種已達600多種。同時鱟試劑在臨床上的應用也逐漸受到重視，全國每年感染革蘭氏陰性菌的患者人數眾多，大部分患者在革蘭氏陰性細菌感染后，具有發病率高、病情進展快、死亡率高等特點，嚴重威脅人類健康。革蘭氏陰性菌細胞壁主要成分為脂多糖（細菌內毒素），國內外學者研究發現能從體液或血液中檢出內毒素水平可為診斷革蘭氏陰性菌提供有效依據。

細菌內毒素檢測試劑盒已經應用于大部分臨床上多年，由于許多疾病會引起黃疸、溶血、脂血。黃疸會引起血清中膽紅素升高；溶血會引起血清中血紅蛋白升高；脂血會引起血清中甘油三酯升高。膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯使血清分別顯黃色、紅色、濁度。該性狀的血清影響結果觀察，在利用儀器檢測時，使檢測OD值偏高，可能產生假陽性。這膽紅素、甘油三酯、血紅素三種物質也會會干擾鱟試驗正常反應。目前醫院使用試劑盒大多采用加熱稀釋法對樣品處理，但該法使黃疸、脂血、溶血樣本得不到有效處理，不適用于處理這三項特殊血清樣本；另外，加熱稀釋法也很難完全除去血清中干擾物質（人血清中存在許多蛋白酶、凝血因子、球蛋白等），也會影響檢測的準確性，致使檢測結果呈假陰性或假陽性；其次，由于內毒素化學結構為含有3個截然不同的區域：O特異側鏈、核心多糖、類脂A，核心多糖和類脂之間有KDO鍵相連，類脂A是以脂化的葡萄糖胺二糖通過焦磷酸酯組成的糖脂化，加熱稀釋法處理血清樣本，由于加熱可能破壞內毒素的化學結構，從而影響檢測結果，可能出現假陰性現象。鑒于此，為了消除這三種膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯的影響，我們反復研究幾種血清處理方法。我們最終發現了處理該三種黃疸、溶血、脂血血清處理方法，即是高氯酸-冰醋酸法處理血清能消除這三種物質（膽紅素、三油甘脂、血紅素）的干擾。而我們高氯酸-冰醋酸血清處理液，反復試驗，研制出具有獨特配方，成分含高氯酸，冰醋酸，NaOH，KCl,這些成分用于黃疸、溶血、脂血樣本前處理，有效克服含有膽紅素、血紅蛋白或甘油三脂的呈黃色、紅色、濁度的血清性狀的干擾，得到理想的回收率；同時又能去除血清中存在許多蛋白酶、凝血因子、球蛋白，最大程度降低這些蛋白酶干擾鱟試劑試驗，大力提高抗干擾能力；此外，高氯酸-冰醋酸血清處理液制備程序上添加磷酸鹽緩沖液，使產品均一性及穩定性，最大限度保護了內毒素結構，使更為準確檢測出內毒素濃度。

經前處理的血清樣本再經以下反應原理進行反應，檢測出人體血液的內毒素含量。細菌內毒素檢測試劑盒（終點顯色基質法）檢測細菌內毒素（LPS）的原理是：細菌內毒素激活主試劑中的C因子，被激活的C因子又激活了B因子，具有活性的B因子隨之將凝固酶原激活為凝固酶。凝固酶則水解顯色基質（Boc-Leu-Gly-Arg-pNA），使之游離出pNA(黃色)，其經重氮偶合后形成紅色的偶氮色素，在545nm的波長下測定吸光度，即可以測定細菌內毒素含量。

發明內容

本發明的目的在于提供提供一種黃疸、溶血、脂血的血清處理劑。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種黃疸、溶血、脂血的血清處理液，其特征在于：所述處理液包含以下成分：（1）0.2moL/L高氯酸，0.1moL/L冰醋酸，（2）0.25moL/L NaOH，（3）0.2moL/L 磷酸鹽緩沖液。

所述的0.2moL/L 磷酸鹽緩沖液即0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液+0.2mol/L氫氧化鈉溶液。