[發明專利]一種組蛋白免疫共沉淀（ChIP）試劑配方

在審

• 申請號: 201710660025.8
• 申請日: 2017-08-04
• 公開（公告）號: CN109387623A
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 李旦
• 申請（專利權）人: 蘇州同因生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種組蛋白免疫共沉淀(ChIP)試劑配方，包含五步，本發明的有益成果為：本發明提供的一種組蛋白免疫共沉淀試劑配方，本發明的方法在經過實例研究后。本發明的配方會綜合被檢測者基因型和組蛋白信息，通過復雜的步驟保證試劑的質量。

技術領域

本發明涉及醫學領域，涉及一種組蛋白免疫共沉淀(ChIP)試劑配方。

背景技術

免疫共沉淀(ChIP)是一種能真實反映細胞內組蛋白與DNA相互作用的實驗技術。其原理是利用抗原抗體反應，通過用特異性抗體將目的蛋白及與之結合的DNA共同沉淀下來，再采用PCR、蛋白質分析技術、生物芯片技術等對目的DNA片段進行分析。組蛋白免疫共沉淀是表觀遺傳學研究的主要內容。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一種解決或部分解決上述問題的組蛋白免疫共沉淀(ChIP)試劑配方。

為達到上述技術方案的效果，本發明的技術方案為：一種組蛋白免疫共沉淀(ChIP)試劑配方，包含：

(1)進行蛋白-DNA交聯和裂解細胞：用終濃度為1％甲醛溶液固定總數為1×10⁷的K562細胞，室溫下放置10min，甘氨酸溶液中止反應；用預冷的PBS洗滌細胞兩次，離心去上清后加入1ml含蛋白酶抑制劑的SDS裂解液裂解細胞；

(2)超聲斷裂染色質：按優化好的條件(100W，每次超聲10s，共5次，間隔30s)斷裂細胞裂解液中的染色質，4℃下離心后保留上清；

(3)免疫共沉淀：超聲處理后的溶液中加入蛋白G-瓊脂糖小珠進行預清除，離心后吸取1％(v/v)上清留作Input溶液在剩余的上清中加入免疫共沉淀抗體，包括陽性對照抗體(anti-RNA Polymerase II，1.0μg/管)、陰性對照抗體(normal mouse IgG，1.0μg/管)和目的抗體(依抗體說明書推薦量：抗ac H3抗體10μg/管，抗ac H4抗體3μg/管)，在4℃搖床上孵育過夜，次日溶液中加入蛋白G-瓊脂糖小珠吸附免疫沉淀復合物，短暫離心后去上清，順次用低鹽、高鹽、氯化鋰和TE緩沖液清洗蛋白G-瓊脂糖小珠；

(4)免疫沉淀復合物洗脫：用洗脫緩沖液洗脫免疫沉淀復合物，同時在裝有Input溶液的管中加入相同體積的洗脫緩沖液；

(5)蛋白-DNA結合物解交聯，釋放DNA：加入5mol/L Na Cl溶液，65℃水浴孵育4-5h或過夜；

(6)用DNA純化柱回收DNA。

本發明的有益成果為：本發明提供的一種組蛋白免疫共沉淀試劑配方，本發明的方法在經過實例研究后。本發明的配方會綜合被檢測者基因型和組蛋白信息，通過復雜的步驟保證試劑的質量。

具體實施方式

為了使本發明所要解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行詳細的說明。應當說明的是，此處所描述的具體實施例僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明，能實現同樣功能的產品屬于等同替換和改進，均包含在本發明的保護范圍之內。具體方法如下：