[發明專利]一組唐氏綜合征標志蛋白及其應用

在審

• 申請號: 201710659516.0
• 申請日: 2017-08-04
• 公開（公告）號: CN107478845A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 戴勇;湯冬娥;眭維國;張若涵;韋曉蓮
• 申請（專利權）人: 戴勇;湯冬娥
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 唐致明

技術領域

本發明涉及生化檢測領域，特別涉及一組唐氏綜合征標志蛋白及其相關應用。

背景技術

唐氏綜合征(Down Syndrome，DS)，在小兒常染色體畸變性所導致的出生缺陷類疾病中最為常見的。該病在新生兒中的發病率極高，患者往往表現為先天性智力低下、面容特殊身體發育遲緩，并伴隨有先天性心臟病、免疫力低下、白血病等多種疾病，DS患者生活往往不能自理，社會適應和勞動能力較差，給家庭乃至社會都帶來了沉重的負擔。

該病尚無有效的治療手段，主要依賴于產前診斷與產前篩查以減少唐氏綜合征患兒的出生。然而傳統的產前篩查漏檢率和假陽性較高。產前診斷如通過羊膜腔穿刺、絨毛膜取樣、臍帶取血等方法獲得胎兒細胞進行培養和進而進行染色體核型分析是產前診斷唐氏綜合征的金標準，但均具有創傷性，易導致出血、感染和流產等并發癥。因此，尋找新的生物標志物，以開發出一種非侵入性、檢出率高的篩查唐氏綜合征胎兒的檢查方法顯得非常迫在眉睫。

發明內容

本發明的目的在于公開一組唐氏綜合征標志蛋白及其相關應用。

本發明所采取的技術方案是：

蛋白組合物ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1作為唐氏綜合征檢測靶點中的應用。

一組唐氏綜合征檢測抗體組，抗體組由ERO1L檢測抗體、APCS檢測抗體、OGDHL檢測抗體、NAP1L1檢測抗體組成。

一種唐氏綜合征檢測試劑盒，檢測試劑盒中含有能夠檢測ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1蛋白的試劑。

一種唐氏綜合征檢測試劑盒，檢測試劑盒中含有能夠檢測ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1蛋白相對應基因表達量的試劑。

一種產前診斷試劑盒，診斷劑盒中含有能夠檢測ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1蛋白的試劑。

能夠檢測ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1的RNA轉錄水平或/和蛋白表達水平的試劑在制備唐氏綜合征檢測試劑盒或制備唐氏綜合征治療藥物中的應用。

能夠檢測ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1的RNA轉錄水平或/和蛋白表達水平的試劑在制備產前唐氏綜合征診斷試劑盒中的應用。

本發明的有益效果是：發明人發現ERO1L、APCS、OGDHL、NAP1L1等蛋白，在懷有唐氏綜合征胎兒的孕婦血清中，表達量明顯上調，因此該蛋白組合物具有成為唐氏綜合征輔助診斷標志物的潛能。

具體實施方式

實施例

1.唐氏綜合征胎兒的確診

選取2013年4月至2014年1月期間到深圳市人民醫院以及中國人民解放軍第一八一醫院進行B超產前檢查的孕婦16例，其中7例B超顯示所孕胎兒為正常型，9例疑似孕唐氏綜合征胎兒。經孕婦及家屬知情同意后，采用G顯帶染色體核型分析技術，對這9例疑似孕唐氏綜合征胎兒的孕婦做進一步確診。具體方法如下：

1)標本采集

臍帶穿刺抽取臍帶血1mL，置于肝素鈉真空管中，立即輕輕混勻。

2)標本接種與培養

用2.5mL注射器向淋巴細胞培養液中滴加混勻后的全血約0.3mL，輕輕搖勻，放入37℃的二氧化碳培養箱中72小時，期間，當培養至第70小時時，用1mL注射器向培養液中加入秋水仙素0.07mL/瓶，搖勻繼續培養。(加秋水仙素前注意觀察培養基l-清液是否仍清亮，若上清液變混濁，說明標本被污染，應立即重新抽血再次培養。)

3)收集細胞

將培養液轉移至15mL刻度離心管中，離心10min(1500r/min)，取出離心管將上清液去掉。沿管壁緩緩加入已預熱至37℃的0.075mol/L KCI溶液8mL，吹打懸起沉淀的細胞，置于37℃水浴12min，在低滲溶液中使紅細胞溶解，淋巴細胞膨脹、染色體分散。

4)固定

從水浴箱中取出離心管，沿管壁緩緩加入2mL新鮮配制的固定液(甲醇：乙酸＝3：1)，小心混勻，室溫靜置2min，1500r/min，離心l0min，棄上清液，用吸管輕輕吹打沉淀直至吹打均勻為止，沿管壁緩緩加入新鮮配制的固定液8mL，混勻，室溫靜置≥30min，重復上述步驟兩次。

5)制片

用吸管輕輕吹打管底沉淀的細胞直至吹打均勻，加人適量固定液混勻，從一定高度將細胞懸液滴落在冰玻片上，立即置于75℃烤箱3小時。

6)顯帶

制好的玻片浸入胰蛋白酶溶液中消化30秒后取出浸入生理鹽水，立即取出浸入稀釋后的吉姆薩染液中染色約4分鐘，自來水沖洗、吹干即可。

7)染色體核型分析