[發明專利]人源抗HIV gp41特異性抗體及其應用

有效

• 申請號: 201710657311.9
• 申請日: 2017-08-03
• 公開（公告）號: CN107383190B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 楊爭;孫澤華;劉曦;余衛業;譚衛國
• 申請（專利權）人: 深圳市慢性病防治中心
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;G01N33/571;A61K39/42;A61P31/18
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明提供一種人源HIV gp41特異性抗體及其應用。本發明利用單個記憶性B細胞分選和抗體基因直接擴增法獲得HIV病毒gp41特異性抗體的可變區片段，通過基因工程方法構建完整IgG抗體的真核瞬間表達載體，并表達純化出IgG蛋白提供的抗體，屬于全人源單克隆抗體，其輕鏈可變區和重鏈可變區的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、3所示。該抗體高親和力特異性結合HIVgp41的近膜區，EC50為0.05μg/ml(0.333nM)，能中和HIV病毒對靶細胞的感染，并能介導以NK細胞為主的效應細胞對HIV感染細胞的殺傷，可以用作HIV感染的治療藥物開發，也可用于HIV病毒抗原檢測試劑的開發。

技術領域

本發明涉及治療用人源基因工程抗體的制備及應用，主要是特異性針對HIV gp41特異性抗體及其制備方法與應用。

背景技術

自1983年人免疫缺陷病毒(HIV)被發現以來，科學家一直致力于HIV疫苗研發。然而，盡管經過30多年的努力，至今沒有針對HIV預防的有效疫苗上市。其中一個最主要的原因是該病毒具有超高的突變頻率，從而賦予其躲避人類免疫系統的壓力。HIV常規治療通常采用高效抗逆轉錄病毒療法(HAART)又稱雞尾酒療法，因為該療法涉及逆轉錄酶抑制劑，整合酶抑制劑，融合抑制劑，蛋白酶抑制劑等藥物中的三種或三種以上聯合使用。然而由于患者需要長期服藥才能有效抑制病毒，藥物的毒副作用致使患者堅持性差。經調查發現，部分HIV感染者雖然攜帶病毒，但是其即使在無任何干預的情況下也不進展為獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)，科學家把這類患者稱為“長期不進展者(LTNP)”或精英抑制者(elitecontroller)。進一步研究發現該類患者體內通常具有高滴度的功能性抗體，能有效防止病毒感染細胞并輔助效應細胞對感染細胞的殺傷和清除。具有廣譜中和活性的HIV單克隆抗體藥物制劑目前國內外已有多個臨床試驗在進行中，其在感染前預防和感染后治療方面都顯示出不凡的效果。抗體的效果不僅與其是否能中和病毒有關，還與抗體是否能介導效應細胞對病毒感染細胞的殺傷(ADCC)也即實現病毒的清除有關。

全人源抗體的獲得目前主要通過抗體文庫展示篩選技術和單個B細胞分選技術。與單細胞分選法相比，抗體文庫篩選獲得的單克隆抗體屬于原始輕重鏈配對的概率極大地降低，而抗體的原始輕重鏈配對可能使抗體的功能實現最大化。單細胞分選法獲得的抗體基因的輕重鏈，理論上均是來自于原始配對，因此，單細胞分選法獲得高效功能性抗體的概率遠高于抗體文庫展示篩選法。

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的免疫球蛋白。人源單克隆抗體由于副作用小，其應用于人類疾病治療通常不需要進行人源化，避免了此過程中的的親和力丟失。人源單克隆抗體在感染性疾病的預防和控制過程中發揮了巨大作用，其能中和病毒，還能介導效應細胞對病毒感染細胞的殺傷，其保護效果在HIV、、MERS病毒，登革熱病毒，漢坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等動物感染模型中得到充分的證實。此外，高親和力、高特異性單克隆抗體還是病原的快速檢測試劑的關鍵組分。

2008年以來，單個B細胞分選和抗體基因直接擴增技術成為人源抗體篩選的主要途徑之一(Tiller等，Journal of Immunological Methods 329，(2008)，112–124)。2010年，Wu等(Science 329,(2010)856-861)利用流式細胞分選技術分選HIV感染者外周血中抗原特異性的單個記憶性B細胞，進而利用逆轉錄PCR技術直接擴增單個細胞的抗體基因VH和Vκ/Vλ,然后將上述基因片段插入全長IgG重組載體進行真核細胞轉染和表達純化，成功獲得著名的HIV廣譜中和單克隆抗體VRC01。由于該技術可以在最短的時間內獲得單細胞來源的抗體基因和重組抗體蛋白，并且可以保證抗體重鏈和輕鏈的原始配對(抗體功能最優)，單細胞分選和抗體基因直接擴增技術迅速成為抗體開發領域的重磅工具。迄今為止，該技術已在HIV，流感，MERS，埃博拉，登革熱等病毒的廣譜中和單克隆抗體的篩選上成功運用，該技術獲得的多個高效抗體先后進入藥物臨床研究。單個B細胞來源的基因工程抗體為抗原快速檢測和抗體制藥領域帶來了新的希望和廣闊前景。