[發(fā)明專利]一種利用單片段置換系聚合改良水稻抽穗揚花期及灌漿期耐熱性的分子育種方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710655927.2
• 申請日: 2017-08-03
• 公開（公告）號: CN108703063A
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發(fā)明（設計）人: 曹志斌;袁林峰;蔡耀輝;聶元元;李永輝;謝紅衛(wèi)
• 申請（專利權）人: 江西省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;C12Q1/6895
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 張榮

1.一種利用單片段置換系聚合改良水稻抽穗揚花期及灌漿期耐熱性的分子育種方法，包括：以保藏號為CGMCC NO.12532的中秈兩系骨干恢復系9311為母本，保藏號為CGMCCNO.12534和CGMCC NO.12535的元江普通野生稻單片段置換系YJ07-04-06和YJ01-05-03雜交得到的F₁為父本，雜交1代，回交3代，再自交3代獲得穩(wěn)定純合株系BC₃F₄，每代都是單穗收獲；

1)種植BC₁F₁，應用SDS法提取DNA，采用所述的元江野生稻(荷花塘3號)染色體單片段置換系YJ07-04-06對應的分子標記引物對RM6515和RM8069(表1)進行PCR擴增，選擇同時含有上述4個來源于元江普通野生稻的分子標記條帶，分子量分別是404bp和184bp的單株與輪回親本9311回交，種子按單株收獲；其中分子標記引物對RM3394正/反向序列為SEQ IDNO.1/SEQ ID NO.2，RM6223正/反向序列為SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4；RM6515正/反向序列為SEQ ID NO.5/SEQ ID NO.6；RM8069正/反向序列為SEQ ID NO.7/SEQ ID NO.8；

表1 引物特征帶大小及序列

1)分子標記輔助第二次選擇：種植BC₂F₁，每株提取DNA后，再利用所述的分子標記引物對確定BC₁F₁單株的基因型，同時具有2個來源于上述野生稻的分子標記條帶，分子量分別是404bp(RM3394)；184bp(RM6223)；224bp(RM6515)和392bp(RM8069)的單株繼續(xù)與輪回親本9311回交；

2)分子標記輔助第三次選擇：種植BC₃F₁，每株提取DNA后，繼續(xù)利用所述的分子標記引物對確定BC₃F₁單株的基因型，同時具有4個來源于上述元江普通野生稻的分子標記條帶，分子量分別是404bp(RM3394)；184bp(RM6223)；224bp(RM6515)和392bp(RM8069)的單株自交，按單穗收獲種子；

3)分子標記輔助第四次選擇：種植BC₃F₂，每株提取DNA后，繼續(xù)利用所述的分子標記引物對確定BC₃F₂單株的基因型，同時具有4個來源于上述元江普通野生稻的分子標記條帶，分子量分別是404bp(RM3394)；184bp(RM6223)；224bp(RM6515)和392bp(RM8069)的單株自交獲得BC₃F₃，按單穗收獲種子。

2.一種利用單片段置換系聚合改良水稻抽穗揚花期及灌漿期耐熱性的分子育種方法，其特征在于：所述的品系2015年揚花期在人工模擬高溫脅迫下結實率為59.2％，比輪回親本結實率增加18.4％，單株產(chǎn)量為25.02g，比輪回親本增加8.72g，株高117.2厘米，穗長25.2厘米，每穗實粒數(shù)99.8粒；在抽穗期高溫脅迫寫下該選系(″元野3號″)的結實率、每穗實粒數(shù)和單株產(chǎn)量平均值較9311極顯著增加，株高、穗長、單株有效穗、每穗總粒數(shù)值較9311差異不顯著；2015年灌漿期在人工模擬高溫脅迫下千粒重為28.8g，比輪回親本千粒重增加1.2g，單株產(chǎn)量為36.2g，比輪回親本單株產(chǎn)量增加8.72g，株高117.6厘米，穗長25.6厘米，每穗實粒數(shù)147.9粒；在灌漿期高溫脅迫寫下該選系(″元野3號″)的千粒重和單株產(chǎn)量平均值較9311極顯著增加，株高、穗長、單株有效穗、結實率、每穗總粒數(shù)值較9311差異不顯著。