[發明專利]能擴寬HCG檢測范圍的免疫膠體金檢測裝置及檢測方法

在審

• 申請號: 201710655896.0
• 申請日: 2017-08-03
• 公開（公告）號: CN107389955A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 陳逸桐;周洪銳;李昀地;楊延瑞;宋兆瑞;魏華英;李洲
• 申請（專利權）人: 天津中新科炬生物制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司12107
• 代理人: 李蕊

1.一種擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：包括HCG檢測試紙，所述HCG檢測試紙包括含有膠體金標記HCG抗體的膠體金墊和NC膜，所述NC膜上包被有配對HCG抗體作為T線、抗鼠IgG作為C線。

2.根據權利要求1所述擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：所述NC膜是一種由硝酸纖維素構成的多孔結構的膜，孔徑為8-15um。

3.根據權利要求1所述的擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：所述NC膜是由下述方法制備得到的：以0.01M pH 7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)將配對的HCG抗體配制成0.8-1.5mg/mL，用噴膜儀在NC膜上以1.2-1.4ul/cm的參數進行劃線，包被T線，同時在NC膜上包被1-2mg/ml的抗鼠IgG作為C線，干燥，即得。

4.根據權利要求1所述的擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：所述膠體金墊是由下述方法制備得到的：采用氯金酸－檸檬酸三鈉法制備直徑為40±5nm的膠體金溶液，取膠體金溶液，用0.2M K₂CO₃將溶液調到pH7.0-pH8.0，然后將膠體金緩慢攪拌，按每1ml溶液加入5ug-10ug將HCG標記抗體加入到溶液中，繼續攪拌30分鐘，再加入到終濃度為0.5％的PEG2000和0.5％的水解酪蛋白進行封閉，標記結束后以12000rpm離心，棄上清，沉淀按60％原體積復溶至不同配比的膠體金工作液中(0.1MTris/HCl緩沖液，pH7.5，含0.2％水解酪蛋白，6％蔗糖，0.5％Tween 20)。然后將標記膠體金溶液按1ml溶液鋪20cm²的比例加樣于無紡布上，在溫度20-25℃，相對濕度在＜30％的干燥間干燥3-5小時，制成膠體金墊。

5.根據權利要求1所述的擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：所述HCG檢測試紙由膠體金墊、NC膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成，所述樣品墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊從塑料底板一端依次排列至另一端。

6.根據權利要求5所述的擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：所述樣品墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊為吸水濾紙。

7.根據權利要求1所述的擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，其特征在于：所述HCG檢測試紙的寬度為3-5mm，長度為7-8cm。

8.優選的，上述擴寬HCG免疫膠體金檢測范圍的檢測裝置，包括HCG檢測試紙、卡殼和免疫層析判讀結果記錄儀，所述卡殼包含上蓋和下蓋兩個部分，所述卡殼下蓋內部平行放置所述HCG檢測試紙組成檢測卡，所述卡殼上蓋一側對應HCG檢測試紙的樣品墊部分設置了樣品孔和稀釋液孔，用于加入樣本和稀釋液，卡殼上蓋的中間部分應對試紙NC膜中部設置了視窗口，用于觀察NC膜上的C、T線，并判定結果，所述免疫層析判讀結果記錄儀內置了是否發生鉤狀效應的判定方法和對應區域(未發生鉤狀效應區域和發生鉤狀效應區域)的相應標準曲線，所述檢測卡與該免疫層析判讀結果記錄儀配合使用，用于對檢測結果的定量判定，對HCG檢測范圍為10-1600000/mL。

9.一種應用上述免疫膠體金檢測裝置的HCG檢測方法，檢測時將被檢樣本(如5μl血清、血漿或10μl全血樣本)加入到樣本孔中，然后在稀釋液孔中加入70ul樣品稀釋液(PBS)，在15-20分鐘內，用免疫層析結果判讀記錄儀對檢測結果進行判定。

10.優選的，上述HCG檢測方法，所述免疫層析結果判讀記錄儀的判斷方法如下：分別在t0.5和t時間時使用免疫層析判讀記錄儀測定膠體金測試條的反應線(T線)的信號值GOD0.5和GOD值，t表示完全反應的時間，t0.5表示完全反應時信號值一半的時間，當GOD/GOD0.5>1.5時判定為未出現鉤狀效應，按直線回歸方程對檢測結果的信號值進行濃度值計算，當GOD/GOD0.5<1.5時判定為出現鉤狀效應，按照logistic曲線擬合四參數法方程對檢測結果的信號值進行濃度值的計算。