[發(fā)明專利]一種測定樣品中亞硫酸氫鹽的檢測方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710654400.8
• 申請(qǐng)日: 2017-08-03
• 公開（公告）號(hào): CN107328748B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李照;李東鈺;楊興斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;C07D405/06;C09K11/06
• 代理公司: 西安智萃知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 61221
• 代理人: 趙雙

本發(fā)明涉及亞硫酸氫鹽檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于熒光探針方法的亞硫酸氫鹽檢測試劑盒及其檢測方法，所述試劑盒包含試劑儲(chǔ)備液a和試劑儲(chǔ)備液b；所述試劑儲(chǔ)備液a是pH值為6～8的磷酸鹽緩沖液，所述試劑儲(chǔ)備液b為式(I)所示熒光探針的有機(jī)溶劑溶液。該熒光探針本身的熒光強(qiáng)度非常強(qiáng)，亞硫酸氫根能夠與半菁骨架中的碳?碳雙鍵發(fā)生邁克爾加成反應(yīng)，使得熒光母體的共軛體系被打斷，從而發(fā)生熒光猝滅，熒光強(qiáng)度顯著減弱，從而檢測到亞硫酸氫鹽。本試劑盒熒光產(chǎn)生、淬滅的反應(yīng)速度快，靈敏度高，熒光最大發(fā)射波長處于近紅外區(qū)域，背景信號(hào)干擾小，具有更高的分辨率，且探針對(duì)亞硫酸氫根具有特異性，不受其他常見的無機(jī)鹽離子的干擾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于亞硫酸氫鹽檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及基于近紅外熒光探針方法的亞硫酸氫鹽檢測試劑盒及其檢測方法，特別涉及一種測定樣品中亞硫酸氫鹽的檢測方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

近年來，隨著人們生活水平的提高，食品安全問題也越來越受到人們的關(guān)注。食品添加劑是引起食品問題的主要原因，在眾多的食品添加劑中，亞硫酸氫鹽是重要的食品防腐保鮮劑。由于亞硫酸氫鹽具有還原性，可以防止氧化酶對(duì)食品營養(yǎng)成分的破壞和顏色改變，能抑制微生物繁殖，因而具有漂白、防腐、抗氧化等作用，既可以作為果蔬的防腐保鮮劑，也可以作為防止食品變質(zhì)的抑制劑。經(jīng)常用于食品及飲料中的抗氧化、防止酶促褐變以及抑菌等過程。

然而，過多的亞硫酸氫鹽也是有危害的，它的毒性主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：(1)亞硫酸氫鹽類的食品添加劑使用過量，將會(huì)嚴(yán)重破壞食品中的營養(yǎng)物質(zhì)，降低食品的營養(yǎng)價(jià)值；亞硫酸氫鹽能夠與氨基酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，還能與多種維生素結(jié)合，特別是與維生素B₁發(fā)生不可逆的親核反應(yīng)，會(huì)造成維生素B1發(fā)生裂解，裂解為其它產(chǎn)物，維生素B1就此被全部損失；此外，亞硫酸氫鹽還會(huì)促使細(xì)胞發(fā)生變異，誘導(dǎo)不飽和脂肪酸的氧化等危害。(2)人類食入過量的亞硫酸氫鹽會(huì)出現(xiàn)頭痛、惡心、暈眩及氣喘等不良反應(yīng)。有證據(jù)表明，一些對(duì)亞硫酸氫鹽極其敏感的人，遇到非常低濃度的亞硫酸氫鹽時(shí)，支氣管會(huì)嚴(yán)重收縮導(dǎo)致哮喘加重。(3)如果是動(dòng)物長期吃含有亞硫酸氫鹽的食物，會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)發(fā)炎、骨髓萎縮等不良的癥狀，這會(huì)對(duì)動(dòng)物的成長帶來障礙。

因此，世界各國對(duì)于食品中的亞硫酸氫鹽添加量有嚴(yán)格的限定。世界衛(wèi)生組織規(guī)定每人每天亞硫酸氫鹽的攝入量不能超過0.7mg/kg。美國FDA規(guī)定食品及飲料中的添加量不得超過125μM。目前，國內(nèi)外檢測亞硫酸氫鹽普遍采用的方法有比色法、光譜法、色譜法、電化學(xué)法、毛細(xì)管電泳法和化學(xué)發(fā)光法。這些方法檢測成本較高，測定時(shí)間較長，且需要具有一定專業(yè)技術(shù)水平的人員才能進(jìn)行操作，只適合在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行研究分析。并且一般的化學(xué)檢測方法選擇性差、靈敏度低，無法避免食品或生物復(fù)雜體系中其它物質(zhì)的干擾，目前并沒有能夠?qū)嶋H應(yīng)用的亞硫酸氫鹽檢測試劑盒。

因此，研究選擇性好、靈敏度高、使用方便、抗干擾能力強(qiáng)的亞硫酸氫鹽檢測試劑盒對(duì)于現(xiàn)場操作的亞硫酸氫鹽檢測分析方法具有重要意義。

熒光探針主要是依靠熒光信號(hào)為檢測手段，通常有熒光的增強(qiáng)、淬滅或者發(fā)光波長的變化。用于對(duì)外來物種進(jìn)行檢測的熒光探針的設(shè)計(jì)和研究，是近年來受到廣泛關(guān)注的一個(gè)課題。熒光探針通過分子的發(fā)光現(xiàn)象和吸收光譜的變化來探測分子間的相互作用，其優(yōu)點(diǎn)可以概括為以下幾個(gè)方面：(1)方便快捷，具有很高的靈敏度；(2)可以利用光纖技術(shù)實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞的實(shí)時(shí)檢測；(3)如果在吸收光譜上有比較大的變化，可以在不借助于任何儀器的情況下，直接通過顏色的變化來達(dá)到檢測的目的。許多分子結(jié)構(gòu)因素和它所處的環(huán)境因素都可用來控制熒光發(fā)光效率和吸收光譜的變化。因此，如TICT發(fā)光、MLCT發(fā)光、LMCT發(fā)光、激基締合物和激基復(fù)合物發(fā)光以及和重原子效應(yīng)、光誘導(dǎo)電子轉(zhuǎn)移、電子能量轉(zhuǎn)移等相關(guān)的光物理和光化學(xué)特征等都已成功地用于化學(xué)檢測方法的設(shè)計(jì)中。

熒光檢測技術(shù)具有方便快捷、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn),因此熒光識(shí)別檢測成為選擇性檢測特定物種的良好選擇。近年來對(duì)于與生命、環(huán)境相關(guān)的陽離子(主要是金屬離子)的分子熒光探針已經(jīng)被廣泛研究,在環(huán)境化學(xué)、生物化學(xué)以及細(xì)胞生物學(xué)等方面的應(yīng)用也取得了一些進(jìn)展。