[發(fā)明專(zhuān)利]一種方便檢測(cè)葡萄糖的非酶電化學(xué)生物傳感方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710654268.0
• 申請(qǐng)日: 2017-08-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107422009B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴(lài)國(guó)松;黎波
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/30
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/30
• 代理公司: 黃石市三益專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 42109
• 代理人: 瞿暉

1.一種方便檢測(cè)葡萄糖的非酶電化學(xué)生物傳感方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）電化學(xué)傳感器的制備

向絲網(wǎng)印刷碳電極的工作電極表面滴加1.8μL 1mg/mL的氧化石墨烯分散液，室溫晾干后轉(zhuǎn)入濃度為50mM pH=6.5的Tris-HCl中，采用恒電位電化學(xué)還原法，即電位為-1.2V，掃描速率為100mV/s，時(shí)間為600s，將氧化石墨烯轉(zhuǎn)化為還原石墨烯，水洗后室溫晾干，即可得到還原石墨烯修飾電極；再向制備好的還原石墨烯修飾電極表面滴加2.0μL濃度為3.0μM苯基-葡聚糖的10mM pH=7.4 Tris-HCl溶液，37℃反應(yīng)2h后水洗晾干，置于4℃干燥環(huán)境中保存待用；

（2）Au NP-Con A納米探針的制備

取1.0mL直徑為13nm的金納米粒子，離心棄去上清液后，將金納米粒子分散于裝有1.0mL 5mM pH=7.0 Tris-HCl和0.5% 吐溫-20的混合溶液的容器中，向其中加入500μL濃度為1mM的3-巰基丙酸溶液，旋轉(zhuǎn)混勻反應(yīng)2h，再將所得的溶液離心，使用10mM pH=7.0的Tris-HCl溶液洗滌兩次，再加入100μL濃度為3mg/mL的1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽、60μL濃度為1mg/mL的刀豆素A和100μL濃度為3mg/mL牛血清白蛋白的三者混合液，于旋轉(zhuǎn)混勻儀中室溫反應(yīng)1h，然后將所得產(chǎn)物經(jīng)冷凍離心、使用10mM pH=7.0的Tris-HCl溶液洗滌兩次后分散于500μL 濃度為10mM的Tris-HCl含有2mM Ca²⁺和2mM Mn²⁺的溶液中，于4℃保存待用，所述Con A為刀豆素A；

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液中葡萄糖含量的檢測(cè)

向制備好的傳感器表面滴加20μL Au NP-Con A納米探針和10μL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，37℃下動(dòng)態(tài)溫育30min后采用50mM pH=7.0 Tris-HCl/吐溫-20溶液和Tris-HCl溶液分別清洗、晾干后，滴加30μL 0.1mol/L HCl溶液，在1.3V恒電位預(yù)氧化40s后立即通過(guò)示差脈沖伏安法在0.5-0V范圍內(nèi)記錄其電流響應(yīng)值，從而檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液中葡萄糖的含量；

（4）樣品中葡萄糖含量的檢測(cè)

取臨床血清樣品，每個(gè)樣品分別進(jìn)行5個(gè)平行試驗(yàn)，向制備好的傳感器表面滴加20μLAu NP-Con A納米探針和10μL樣品溶液，處理方法同上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測(cè)血清樣品中葡萄糖的含量。