[發明專利]一種采用單側兩點注射法建造帕金森病模型鼠的方法

在審

• 申請號: 201710653745.1
• 申請日: 2017-07-19
• 公開（公告）號: CN107485463A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 楊新玲;高華;賈叢康;姜濤;王玉玲;羅琴;毛潔萍;李艷霞;夏歡;姚亞妮
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學第二附屬醫院
• 主分類號: A61D1/00
• 分類號: A61D1/00;A61D7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種采用單側兩點注射法建造帕金森病模型鼠的方法。

背景技術

帕金森病(Parkinson disease，PD)作為神經系統退行性病變，其典型的病理特征為中腦黑質多巴胺(dopamine DA)能神經元缺失以及黑質紋狀體通路DA數量降低。帕金森動物模型的建立方法有多種，目前最常用的是6-OHDA(6羥基多巴胺)制備的大鼠模型和1-甲基-4-苯基-1，2，3，6四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)制作的小鼠或靈長類動物模型。通常以選擇大鼠制作動物模型居多。6-OHDA誘發的PD動物模型在神經生化、病理和行為學方面與人類PD具有很大相似性，已被廣泛用于PD的研究。然而，6-0HDA誘導PD神經退行性變性的程度和特點明顯受注射部位的影響口。6-OHDA建造PD大鼠模型目前多采用黑質致密部(SNc)、中腦腹側被蓋(VTA)、紋狀體及前腦內側束(medial forebrain bundle MFB)單點或雙點注射法來制作單側或雙側損毀PD模型。SNc區域小，一般造模成功率低。VTA作為另一個重要靶點與軀體運動密切相關，與PD病理有關的重要區域，如果單獨損傷，也會出現造模率低的情況。采用SNc與VTA的雙點聯合毀損法，可以使損傷范圍較大，縮短造模周期，有效提高造模成功率建立穩定的模擬PD中晚期的大鼠模型，為疾病的研究治療提供實驗室基礎研究平臺。

發明內容

本發明的目的在于提供一種采用單側兩點注射法建造帕金森病模型鼠的方法。

其具體技術方案為：

一種采用單側兩點注射法建造帕金森病模型鼠的方法，包括以下步驟：

步驟1、將大鼠腹腔注射麻醉后，剪去頭頂部毛發，固定于腦立體定位儀上，雙側耳桿尖端插入外耳道，使頭部固定保持水平，并盡量使前、后囟保持同一平面上，碘酒消毒，切開頭皮、皮下組織和骨膜；

步驟2、采用牙科鉆或注射器針頭小心鉆透定位處的顱骨不要損傷硬腦膜，按確定右側、SNc：前囟后5.4±0.1mm，矢狀縫右側1.4±0.1mm，硬腦膜下7.8±0.1mm；VTA：前囟后5.0±0.1mm，中線右側0.9±0.1mm，硬腦膜下7.2±0.1mm，確定好的坐標將吸入藥物的微量注射器連接于微量推進器上，向SNc和VTA注射配置好的6-OHDA 5μl，垂直入顱，緩慢進針，注射保持速度為1μl/min，留針10min，緩慢退針1mm/min，術中觀察大鼠生命體征；

步驟3、縫合后，三天連續腹腔注射青霉素5萬單位以防治感染，建造動物模型；

步驟4、在10天后腹腔注射APO誘發大鼠向左側的旋轉行為，注射后10min大鼠就出現行為學改變，連續記錄40min：旋轉時多數以左側后肢為支點，身體環曲呈“C”狀，首尾相接，伴探嗅覓食樣動作，有的旋轉速度過快甚至出現翻轉。

進一步，步驟2中，所述的注射器針頭為4號注射器針頭。

進一步，步驟2中，所述的6-OHDA的濃度為2μg/μl。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

本發明的方法在模型制作過程中采用針頭穿刺大鼠顱骨可以有效節省模型制作時間，同時可減少因力度過大導致的穿透深度過深導致腦組織的損傷，方便快捷，對儀器的要求簡單同時可更加無菌。另一方面，采用的單側兩點方法制備大鼠PD模型，可以從病理基礎仿效PD的發生，更加符合疾病本書的發病機制，更能縮短模型制作時間，從而提高模型的時效性，同時也可有效保證成功率。適合PD基礎的研究。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明的技術方案作進一步詳細地說明。