[發明專利]一種Gal?1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法

在審

• 申請號: 201710653572.3
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107287274A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 楊平常;徐靈芝;謝瑞娣;李小西;李茂剛
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙)11491
• 代理人: 黃耀鈞

技術領域

本發明屬于醫療藥物技術領域，尤其涉及一種Gal-1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法。

背景技術

免疫耐受是指機體免疫系統接受某種抗原作用后產生的特異性的免疫無應答狀態。對特異性抗原產生免疫耐受的個體，再次接觸該抗原刺激后，不發生免疫應答或不能發生用常規方法可檢測到免疫應答。因此正常的免疫耐受機制對維持機體健康至關重要。目前對免疫耐受產生的機制還不十分明了。雖然近年來國際上和國內對損害免疫耐受的因素研究進展很快，但對于使已經形成的免疫耐受損傷的恢復及其導致的疾病的康復還遠不能令人滿意。動物實驗和臨床研究表明，免疫耐受失常和多種疾病的發病有關，例如過敏性疾病(如哮喘、食物過敏)，自身免疫性疾病(如糖尿病、系統性紅斑狼瘡)以及某些非特異性炎癥病(如炎癥性腸病)等。這些疾病的發病人數眾多，每年治療這些疾病的醫療費用耗資巨大。因此，由于免疫耐受失常而引起的疾病對人類的健康和社會經濟有重大的負面影響。

綜上所述，現在的技術存在的問題是：目前免疫耐受失常疾病的治療是特異性免疫治療(SIT)，系世界衛生組織確定的對免疫耐受失常而引起的疾病治療的唯一的特異性治療方法。但SIT的療效很不滿意，療程太長(長達3年)，療效急需進一步改善；并且，SIT缺乏促使失常的免疫耐受機能的恢復方法的理論指導。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了Gal-1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法。

本發明是這樣實現的，一種Gal-1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法，口服Gal-1能使IEC產生大量的整合素avb6；avb6是一種蛋白酶，能切割TGFb(轉化生長因子β)前體上的短肽使之獲得活性；TGFb是機體免疫耐受機制的關鍵分子；除了能發揮免疫調節功能之外，還能誘導免疫調節細胞；因此當IEC同時吸收Gal-1和特異性抗原時，腸粘膜內的免疫系統即可產生抗原特異性免疫調節細胞，抑制過敏反應。

所述Gal-1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法包括以下步驟：

步驟一，Gal-1采用梯度濃度配制；

步驟二，在IEC中培養；

步驟三，將共刺激分子測定結果和Gal-1濃度進行相關分析；

步驟四，IEC細胞株的使用；

步驟五，微生物產物，建立過敏反應動物模型中用作佐劑的微生物產物；

步驟六，細胞培養時間可根據實驗結果調整。

進一步，所述Gal-1的濃度為0～5μM。

進一步，所述IEC培養密度為10⁶細胞/ml。

進一步，所述IEC細胞株：包括IEC-6，T84，HT-29和Caco-2。

進一步，所用抗原為卵白蛋白(OVA)，是一種模式抗原；作為抗原的代表。

進一步，所述過敏反應動物模型從5周，致敏小鼠坐或/和Gal-1處理；治療1周后，用特異性抗原OVA致小鼠免疫，第二天處死小鼠，觀察腸道過敏反應。

本發明的優點及積極效果為：通過同時使用Gal-1和OVA，誘導OVA-特異性免疫調節細胞；從而逆轉腸道粘膜的過敏狀態；使之恢復為免疫常態；腸道的過敏狀態被抑制；恢復正常。口服Gal-1能使IEC產生大量的整合素avb6；avb6是一種蛋白酶，能切割TGFb(轉化生長因子β)前體上的短肽使之獲得活性；TGFb是機體免疫耐受機制的關鍵分子；除了能發揮免疫調節功能之外，還能誘導免疫調節細胞；因此當IEC同時吸收Gal-1和特異性抗原時，腸粘膜內的免疫系統即可產生抗原特異性免疫調節細胞，抑制過敏反應。

附圖說明

圖1是本發明實施提供的Gal-1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法流程圖。

圖2是本發明實施提供的過敏反應動物模型結果示意圖。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

下面結合附圖對本發明的應用原理作詳細的描述。

如圖1所示，本發明實施例提供的Gal-1使IEC產生免疫耐受信號的測定方法包括以下步驟：

S101：Gal-1和LPS采用梯度濃度配制；

S102：在IEC中培養；

S103：將共刺激分子測定結果和Gal-1濃度進行相關分析；

S104：IEC細胞株的使用；