[發(fā)明專利]一種化學(xué)成分確定的細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710652138.3
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN109385398B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁芳;賈梅;徐立新;師忠芳
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市神經(jīng)外科研究所
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N5/071
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿;趙青朵

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種培養(yǎng)基添加物，并提供了含有該添加物的化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的添加物能夠替代血清，且在促進(jìn)細(xì)胞生長方面更有優(yōu)勢。其適用于培養(yǎng)多種細(xì)胞，特別適合用于培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞，從而避免神經(jīng)細(xì)胞與血清接觸，做大限度的模擬體內(nèi)細(xì)胞生長環(huán)境，還適用于培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，從而避免成纖維細(xì)胞在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)應(yīng)用時刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的可能。本發(fā)明提供的添加物性質(zhì)穩(wěn)定，4℃環(huán)境可穩(wěn)定保存3～4個月。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種化學(xué)成分確定的細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

使用添加血清的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)已有漫長歷史。血清中含有細(xì)胞培養(yǎng)所需的多種營養(yǎng)成分和因子，但是，目前，市面上的血清種類繁多，例如，根據(jù)血源產(chǎn)地，可分為：國產(chǎn)血清、進(jìn)口血清(澳洲來源、新西蘭來源等)；根據(jù)種屬，可分為：牛血清、馬血清等；根據(jù)動物的年齡，例如，可分為：胎牛血清、小牛血清等。實(shí)際應(yīng)用中，面對多種商品化的血清很難確定哪一種更加適用；并且，由于血清品質(zhì)受到血源物種的身體狀況影響，即便同一種來源的血清也存在不同批次組分差異較大的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)難以很好的重復(fù)；另外，有些商品化的血清會因特殊疾病瘋牛病引起血清的進(jìn)口受限等。盡管血清存在缺點(diǎn)，但使用血清有諸多益處，因此，它們已廣泛存在許多細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用之中。

對科學(xué)研究及臨床研究而言，實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性與可控性是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵因素。血清來源廣，成分復(fù)雜且不明確，批次間差異大，對實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的影響無法確定，使科研及臨床研究重復(fù)性差，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

由于血腦屏障的存在，有些細(xì)胞在生物體內(nèi)實(shí)際是不與血清接觸的，例如：神經(jīng)細(xì)胞；神經(jīng)細(xì)胞包括神經(jīng)元(neurons)和星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocytes，AST)，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)活動中發(fā)揮重要作用。體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞是對大腦功能研究的重要手段。但這些細(xì)胞在進(jìn)行體外培養(yǎng)研究時，如采用含有血清的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，雖然能夠保證其具有較高的活性，但卻無法真實(shí)的模擬體內(nèi)的環(huán)境。

皮膚成纖維細(xì)胞不僅在創(chuàng)傷修復(fù)方面發(fā)揮著重要的功能，由成纖維細(xì)胞重編程得到誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，可誘導(dǎo)分化成多種細(xì)胞，例如：神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞等，為疾病的治療提供了新途徑。對轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)而言，血清中存在的多種抗原，使用添加血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的細(xì)胞進(jìn)行在體實(shí)驗(yàn)時，存在刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體的可能，使科研成果應(yīng)用到臨床遙不可及。

使用化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基的益處包括：減少血清批次間差異造成的實(shí)驗(yàn)批間差異，最大程度地增加實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性與可控性。因此，本領(lǐng)域需要一種化學(xué)成分確定的細(xì)胞培養(yǎng)基，使細(xì)胞培養(yǎng)的效果不劣于添加血清培養(yǎng)基，且能夠使實(shí)驗(yàn)條件更加嚴(yán)格可控，對腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的研究可能會有重大改變，成纖維細(xì)胞在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)各方面的應(yīng)用更加安全。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種化學(xué)成分確定的細(xì)胞培養(yǎng)基及其應(yīng)用；本發(fā)明提供的添加物用于細(xì)胞的培養(yǎng)，能夠取得優(yōu)于或相當(dāng)于添加血清進(jìn)行培養(yǎng)的效果。

本發(fā)明提供的添加物包括如下質(zhì)量份的：

肝素-表皮生長因子

樣生長因子 2.5×10^-4～2.5×10^-2份。

本發(fā)明提供的添加物在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的添加物化學(xué)成分明確，能夠避免血清對培養(yǎng)細(xì)胞造成的一系列不利影響，例如：血清對細(xì)胞的毒性作用，使細(xì)胞發(fā)生基因改變等；使用該添加物能夠使實(shí)驗(yàn)條件更加穩(wěn)定、可控，從而使因血清選擇及批次間差異而造成的實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性差的弊端得以消除。

本發(fā)明提供的添加物可為粉末狀固體，也可以溶液形式存在，本發(fā)明對此不做限定。其中各組分皆可于市場購得。當(dāng)其以溶液形式存在時，每5ml溶液中包括：