[發(fā)明專利]一種檢測(cè)西瓜“京美”雜交種子純度的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710651059.0
• 申請(qǐng)日: 2017-08-02
• 公開（公告）號(hào): CN107326083B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張海英;許勇;宮國義;孫宏賀;郭紹貴;張潔;任毅;李茂營
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;張立娜

1.一種檢測(cè)西瓜“京美”雜交種純度的方法，包括如下步驟：

(A1)從待測(cè)西瓜種子中隨機(jī)選取若干樣本，堿法提取基因組DNA；以各樣本的基因組DNA分別作為模板，采用由序列表中序列1和序列2所示兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到各樣本的擴(kuò)增產(chǎn)物；

(A2)將步驟(A1)所得各樣本的擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行8％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，電壓120V，根據(jù)電泳譜圖按照如下確定各樣本是否為真正的“京美”雜交種：若所述樣本的電泳圖譜上同時(shí)具有大小分別為221bp和229bp的兩個(gè)目的條帶，則視所述樣本為真正的“京美”雜交種；若所述樣本的電泳圖譜上不同時(shí)具有大小分別為221bp和229bp的兩個(gè)目的條帶，則視所述樣本為假的“京美”雜交種；

(A3)根據(jù)步驟(A2)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果計(jì)算所述待測(cè)西瓜種子中“京美”雜交種的純度。

2.一種鑒定待測(cè)西瓜種子是否為“京美”雜交種的方法，包括如下步驟：

(B1)從待測(cè)西瓜種子中堿法提取基因組DNA，作為模板，采用由序列表中序列1和序列2所示兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；

(B2)將步驟(B1)所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行8％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，電壓120V，根據(jù)電泳譜圖按照如下確定所述待測(cè)西瓜種子是否為“京美”雜交種：若所述待測(cè)西瓜種子的電泳圖譜上同時(shí)具有大小分別為221bp和229bp的兩個(gè)目的條帶，則所述待測(cè)西瓜種子為或候選為“京美”雜交種；若所述待測(cè)西瓜種子的電泳圖譜上不同時(shí)具有大小分別為221bp和229bp的兩個(gè)目的條帶，則所述待測(cè)西瓜種子不為或候選不為“京美”雜交種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：進(jìn)行所述PCR擴(kuò)增時(shí)采用的退火溫度為55℃。

4.由序列表中序列1和序列2所示兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)在如下(C1)或(C2)中的應(yīng)用：

(C1)檢測(cè)西瓜“京美”雜交種純度；

(C2)制備用于檢測(cè)西瓜“京美”雜交種純度的試劑盒。

5.由序列表中序列1和序列2所示兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)在如下(D1)或(D2)中的應(yīng)用：

(D1)鑒定待測(cè)西瓜種子是否為“京美”雜交種；

(D2)制備用于鑒定待測(cè)西瓜種子是否為“京美”雜交種的試劑盒。