[發明專利]一種基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料及其應用

在審

• 申請號: 201710650223.6
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107478832A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 劉愛驊;劉培
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司21002
• 代理人: 李穎,周秀梅

1.一種基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料，其特征在于：將pVIII融合蛋白(fusion pVIII)組裝在四氧化三鈷納米材料的表面，即獲得仿酶納米材料；所述fusion pVIII與四氧化三鈷磁性納米材料的摩爾比為1000:1。

2.按權利要求1所述的基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料，其特征在于：所述四氧化三鈷納米材料為以牛血清白蛋白(BSA)為模板采用生物模板法合成的四氧化三鈷納米材料Co₃O₄納米花(Co₃O₄ NFs)；

所述fusion pVIII為利用生物淘選技術從風景噬菌體文庫中篩選出與金黃色葡萄球菌特異性結合的噬菌體單克隆，并分離純化展示有特異性九肽配體AQTFLGEQD的噬菌體主要衣殼蛋白pVIII(pVIII融合蛋白，fusion pVIII)。

3.按權利要求1或2所述的基于噬菌體表面展示靶向多肽配體和磁性仿酶納米材料，其特征在于：所述噬菌體表面展示多肽配體以食源性致病菌金黃色葡萄球菌為靶標，利用生物淘選技術從風景噬菌體f8/9文庫進行淘選，并通過特異性測試，獲得能夠特異性識別金黃色葡萄球菌的噬菌體單克隆，進一步通過飽和酚分離純化展示有特異性多肽的噬菌體fusion pVIII。

4.一種權利要求1所述的基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料的應用，其特征在于：所述仿酶納米材料在磁泳富集分離或免疫比色檢測病原微生物中的應用。

5.按權利要求4所述的基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料的應用，其特征在于：所述仿酶納米材料與含有靶標微生物金黃色葡萄球菌的復雜樣品孵育，然后在反應體系底側部添加磁場，使得游離的仿酶納米材料、與微生物結合的多功能生物磁性納米探針均被磁場分離下來，并重懸于50μl緩沖液(10mM，pH 7.4)中，再加入PEG溶液，再利用磁場進行磁泳分離10min，進而磁泳富集分離樣品中微生物實現定性檢測。

6.按權利要求5所述的基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料的應用，其特征在于：所述磁泳富集分離后溶液中加入顯色體系，使其進行免疫反應，進而實現定量的檢測。

7.按權利要求6所述的基于噬菌體表面展示多肽配體和磁性仿酶納米材料的應用，其特征在于：所述免疫比色顯色體系及條件為160μl緩沖液(10mM，pH 4)、20μl 10mM H₂O₂和20μl 6mM 2,2-聯氮基-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨鹽(ABTS)，室溫反應30min，最后測定417nm處的吸光度值。