[發明專利]抗CTRP4單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201710650057.X
• 申請日: 2017-08-02
• 公開（公告）號: CN107286240B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 王露;馬大龍
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏

本發明公開了一種抗CTRP4單克隆抗體及其應用，該抗體由雜交瘤細胞株33或35分泌獲得，其中雜交瘤細胞株33的保藏編號為：CGMCC NO.14307，雜交瘤細胞株35的保藏編號為：CGMCC NO.14308。這兩株細胞株分泌的單克隆抗體能夠與CTRP4蛋白特異性結合，高準確性和特異性地識別內源性CTRP4蛋白，可以通過免疫印跡法、免疫熒光法、免疫組化檢測CTRP4在組織和細胞中的表達。

技術領域

本發明涉及免疫學中免疫球蛋白技術領域的單克隆抗體，具體是一種抗CTRP4的單克隆抗體及其應用。

背景技術

CTRP4是C1q/TNF相關蛋白超家族(C1q and tumor necrosis factor relatedprotein superfamilies，CTRPs)的第4號成員。該家族是由Lodish等于2004年在克隆脂聯素種內的同源基因時被發現命名的，目前已發現15個成員(CTRP1～CTRP15)，與脂聯素、瘦素和抵抗素等一起被統稱為脂肪細胞因子超家族。CTRP4是我們實驗室與國家人類基因組北方中心合作通過生物信息學和高通量篩選平臺發現的一個新的脂肪細胞因子。2011年我們在國際上發表了第一篇報道C1q/TNF相關蛋白4(CTRP4/C1q/TNF related protein 4，CTRP4)的文章，通過N末端測序確定CTRP4帶有經典的信號肽序列，是一個新的分泌蛋白。我們確定重組CTRP4的真核蛋白和原核蛋白具有同樣的生物學功能。

體外研究表明，分泌形式的CTRP4蛋白能夠上調腫瘤細胞中的炎癥信號水平，同時其自身表達也受炎癥信號的上調，另外對CTRP4的功能研究顯示CTRP4能增強腫瘤細胞的增殖水平，在抗腫瘤藥物處理下也會上調，促進腫瘤細胞的抗藥性。體內研究表明，CTRP4在體內具有明確的抗炎和抗癌作用作用。因此這是一個功能重要而復雜的分子。

探尋特異的生物標志物分子用于疾病的早期診斷一直是醫學科研工作者努力的目標之一。目前，分子標志物因其對多種疾病的診斷、治療和預后具有十分重要的作用，日益引起學術界的廣泛關注。而血液中蛋白的變化因其操作簡單、快捷，且創傷小，易被患者接受，是目前診斷多種疾病主要輔助檢查之一，應用廣泛。

CTRP4的研究仍有許多工作要做，而準確識別和分離CTRP4是研究工作中的重要環節。研究初期我們制備了CTRP4的多克隆抗體，但是該抗體的缺點是特異性差，免疫印跡實驗不能識別內源性蛋白。研究發現CTRP4在一些疾病中的表達具有較大差異，并且這種差異在血液中會明顯顯現出來，因此需要制備一種特異性好的抗體檢測疾病中CTRP4的表達變化，這對相關疾病的診斷可能具有重要價值。

發明內容

CTRP4是我們發現的一個新基因，因此國內外任何試劑公司都沒有商品化的單克隆抗體，為了更準確、特異地檢測CTRP4的表達豐度，本發明提供了一種抗CTRP4單克隆抗體。經過實驗檢測，該單克隆抗體的特異性非常好，可以特異識別內源性的CTRP4蛋白，可以通過免疫印跡法、免疫熒光法、免疫組化檢測CTRP4在組織和細胞中的表達。

本發明提供的抗CTRP4蛋白的單克隆抗體，特異性識別CTRP4蛋白，是由第一雜交瘤細胞株或第二雜交瘤細胞株分泌獲得，其中第一雜交瘤細胞株的保藏編號為：CGMCCNO.14307，第二雜交瘤細胞株的保藏編號為：CGMCC NO.14308。

一種雜交瘤細胞株，保藏編號為CGMCC NO.14307。

一種雜交瘤細胞株，保藏編號為CGMCC NO.14308。

一種衍生抗體，由小鼠體內接種保藏編號為CGMCC NO.14307的雜交瘤細胞株或接種保藏編號為CGMCC NO.14307的雜交瘤細胞株，使其產生含抗體的腹水，取出腹水進行純化制備而成。

本發明還提供了上述單克隆抗體或者衍生抗體在制備CTRP4特異性免疫識別試劑中的應用。