[發(fā)明專(zhuān)利]Treg細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的互促增殖作用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710648777.2
• 申請(qǐng)日: 2017-08-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107446883B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程路峰;徐琦;邵培培;李少華;劉長(zhǎng)江;武洋;周勇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 新疆醫(yī)科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/077
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/077
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

本發(fā)明提供CD4⁺CD25⁺ Treg細(xì)胞(CD4⁺CD25⁺ regulatory T lymphocytes，Tregs)與心肌成纖維細(xì)胞(Cardiac Fibroblasts，CFs)共培養(yǎng)時(shí)的互促增殖作用。本申請(qǐng)人將Tregs與CFs在體外共培養(yǎng)48h后，Tregs明顯促進(jìn)CFs的增殖，CFs亦明顯促進(jìn)Tregs的活化及增殖。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的互促增殖作用。

背景技術(shù)

心肌纖維化，其主要表現(xiàn)以心肌正常組織結(jié)構(gòu)中細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積，是多種心臟疾病發(fā)展至一定階段所共有的病理改變。

心肌纖維化與高血壓，心肌梗死，病毒性心肌炎，動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病的病理過(guò)程有著密切聯(lián)系，同時(shí)也是慢性心衰進(jìn)展過(guò)程中重要的病理表現(xiàn)，還可導(dǎo)致心律失常和心源性猝死等嚴(yán)重并發(fā)癥，故預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心肌纖維化是臨床治療心力衰竭的關(guān)鍵點(diǎn)之一。心肌纖維化的發(fā)病機(jī)制至今尚未明確，有觀點(diǎn)認(rèn)為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的過(guò)度激活是引起心肌纖維化的關(guān)鍵。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是免疫反應(yīng)和炎癥作用平衡中的關(guān)鍵因素之一。早在1995年，Sakaguchi就在研究中發(fā)現(xiàn)成年鼠中近10％的外周CD4⁺T細(xì)胞可表達(dá)IL-2受體α鏈CD25的信號(hào)表征，去除這群細(xì)胞會(huì)引起大鼠產(chǎn)生多種自身免疫性疾病，而再次回輸該細(xì)胞就能阻止疾病的發(fā)生。因此將這群細(xì)胞命名為CD4⁺CD25⁺調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4⁺CD25⁺regulatory Tcells,Tregs)。在炎癥反應(yīng)中，機(jī)體免疫系統(tǒng)激活，免疫細(xì)胞可分泌大量的炎癥因子，炎癥因子可直接或間接引起或逆轉(zhuǎn)心肌纖維化。

目前被廣泛認(rèn)可的T細(xì)胞活化的信號(hào)通路調(diào)控為：Kv1.3通道維持T淋巴細(xì)胞的靜息電位，使T細(xì)胞處于能被活化的狀態(tài)；T淋巴細(xì)胞被活化后，KCa3.1通道作為鈣離子激活的鉀離子通道會(huì)使膜電位超極化，使得Ca²⁺持續(xù)內(nèi)流，促使鈣釋放激活Ca²⁺(Ca²⁺-releaseactivating Ca²⁺，CRAC)通道打開(kāi)，上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣庫(kù)釋放Ca²⁺的量，Ca²⁺增加后可通過(guò)鈣依賴(lài)性的蛋白激酶通路啟動(dòng)各種細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄，使其發(fā)揮免疫效能。

發(fā)明內(nèi)容

而本申請(qǐng)人通過(guò)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Tregs在心肌纖維化進(jìn)程中的表現(xiàn)與背景技術(shù)中所述并不相同，確切地說(shuō)，得到了與現(xiàn)有技術(shù)相反的結(jié)論，即：正常大鼠CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞在體外共培養(yǎng)時(shí)，具有互促增殖作用；Tregs無(wú)法起到免疫效果，具有促心肌纖維化的作用。

因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的互促增殖作用。

作為優(yōu)選，所述共培養(yǎng)為體外共培養(yǎng)。

作為優(yōu)選，共培養(yǎng)48h后，CFs細(xì)胞增殖達(dá)平穩(wěn)期。

作為優(yōu)選，共培養(yǎng)后，Tregs時(shí)間依賴(lài)性地增加CFs的增殖；作為優(yōu)選，所述時(shí)間依賴(lài)性是Tregs在0-48h內(nèi)呈時(shí)間依賴(lài)性地增加CFs的增殖。

作為優(yōu)選，共培養(yǎng)后，Tregs促進(jìn)CFs的I型膠原、III型膠原及基質(zhì)金屬蛋白2(MMP2)的分泌。

作為優(yōu)選，共培養(yǎng)后，CFs促進(jìn)Tregs細(xì)胞內(nèi)、外TGF-β和IL-10的分泌。

作為優(yōu)選，共培養(yǎng)后，Tregs細(xì)胞內(nèi)TGF-β的增加明顯高于IL-10的增加。