[發明專利]人源絳蟲ep45基因的通用引物及其鑒別方法有效
| 申請號： | 201710647928.2 | 申請日： | 2017-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN107326082B | 公開（公告）日： | 2020-12-15 |
| 發明（設計）人： | 駱學農;劉光學;梁盼紅;張少華;才學鵬 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蘭州獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279 | 代理人： | 席勇 |
| 地址： | 730010 甘肅*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 絳蟲 ep45 基因 通用 引物 及其 鑒別方法 | ||
1.一種非疾病診斷和治療用途的三種人源絳蟲的鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取三種待鑒別人源絳蟲的總RNA，通過如下所述的通用引物對總RNA進行反轉錄，合成待鑒別人源絳蟲的cDNA；
通用引物包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物；其中，
SEQ ID NO:1：5’-AGAGACAAAGGAAAGGCAGCTG-3’；
SEQ ID NO:2：5’-GGGGCTCAGGCACCTTGAT-3’；
(2)以待鑒別人源絳蟲cDNA為模板進行ep45基因PCR擴增；得到PCR擴增產物；
(3)對所述PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，然后進行膠回收；得到ep45膠回收產物；
(4)使用EcoRI和/或AarI對所述ep45膠回收產物進行酶切處理；
(5)對酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳，根據酶切圖譜對人源絳蟲進行鑒定；所述ep45基因PCR擴增條件為：95℃預變性5min；94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸90s，共30個循環；最后一個循環結束后，72℃延伸10min。
2.根據權利要求1所述的三種人源絳蟲的鑒別方法，其特征在于，所述ep45基因PCR擴增的反應體系如下：
rTaq mixture：25.0μL；
SEQ ID NO:1：1.0μL；
SEQ ID NO:2：1.0μL；
待鑒別人源絳蟲cDNA：1.0μL；
DEPC H2O：22.0μL。
3.根據權利要求1所述的三種人源絳蟲的鑒別方法，其特征在于，步驟（3）中使用凝膠電泳進行DNA的回收和純化。
4.根據權利要求1所述的三種人源絳蟲的鑒別方法，其特征在于，所述待鑒別人源絳蟲的總RNA從絳蟲節片或蟲卵中提取。
5.根據權利要求1所述的三種人源絳蟲的鑒別方法，其特征在于，所述ep45基因的酶切體系如下：
膠回收產物 5 μL
EcoRI或 AarI 1 μL
Buffer 2 μL
去離子水 11.5 μL。
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