[發明專利]一種真菌來源的酸性蛋白酶g412及其基因和應用

有效

• 申請號: 201710646072.7
• 申請日: 2017-08-01
• 公開（公告）號: CN107384899B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 姚斌;羅會穎;郭玉杰;涂濤;王苑;黃火清;柏映國;蘇小運;王亞茹;孟昆
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C12N9/58
• 分類號: C12N9/58;C12N15/57;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737
• 代理人: 劉靜榮

本發明涉及基因工程領域。具體地，本發明涉及一種來源于真菌的酸性蛋白酶g412及其基因和應用，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本發明的酸性蛋白酶具有良好的性質，可作應用于食品、飼料、醫藥等工業。根據本發明的技術方案就可以實現利用基因工程手段生產性質優良適合工業應用的蛋白酶。

技術領域

本發明涉及基因工程領域。具體地，本發明涉及一種來源于真菌的酸性蛋白酶g412、及其基因和應用。

背景技術

蛋白酶是催化蛋白質水解的一類酶，在食品、洗滌、制革等工業都有廣泛應用。微生物源蛋白酶成為了目前的蛋白酶的重要來源。蛋白酶的分類方式有很多，按照其作用的pH將其分成酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶；按活性中心可將蛋白酶分為四類：絲氨酸蛋白酶、天門冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。天冬氨酸蛋白酶是一類在酸性pH下有活性的蛋白水解酶。

蛋白酶在食品、釀造、毛皮與皮革、醫藥和飼料等行業中均有廣泛應用。飼料中酸性蛋白酶的添加可提高蛋白質的可消化性，使高分子的蛋白質降解為低分子的肽及氨基酸，易于畜禽消化吸收，可降低飼料對幼仔消化道的刺激，減少營養障礙，提高飼料利用率，促進畜禽生長。

目前大多數酸性蛋白酶的性質不盡如人意，酶活不是很高，給工業化生產和食品加工帶來極大的浪費，也在一定程度上限制了其應用范圍。由于酶自身最適作用條件與所催化的環境條件之間的差別(如pH、溫度等)，導致酶的催化效率降低，使其工業應用受到限制。用于工業化生產的酸性蛋白酶大多為霉菌酸性蛋白酶，此類酶的最適作用pH值為3.0左右，當pH值升高時，酸性蛋白酶的酶活會明顯降低，且此類酶不耐熱，當溫度達到50℃以上時很不穩定，從而限制了酸性蛋白酶的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種酸性蛋白酶。

本發明的再一目的是提供上述蛋白酶的基因。

本發明的再一目的是提供包含上述蛋白酶的重組載體。

本發明的再一目的是提供包含上述蛋白酶基因的重組菌株。

本發明的再一目的是提供一種制備蛋白酶的方法。

本發明的再一目的是提供上述蛋白酶的應用。

本發明首先所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種性質優良的、適合于在食品、飼料、醫藥等行業中應用的新的蛋白酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1：

其中，該酶全長394個氨基酸，N端26個氨基酸為信號肽序列，即“MVVFSKVTAVVAGLSVMASAVPTSNA”。

因此，成熟的蛋白酶g412的理論分子量為38.9kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2：

該蛋白酶的最適pH為3.0，在pH 2.5-pH 3.5范圍內，該酶能夠維持其70％以上的酶活力；最適溫度55℃，在60℃時依然具有80％以上的酶活力。

本發明還提供了編碼上述蛋白酶的基因。DNA全序列分析結果表明，蛋白酶g412結構基因全長為1494bp，含有3個內含子，本發明通過PCR的方法分離克隆了這個蛋白酶基因g412，蛋白酶g412的cDNA全長為1182bp，其序列如SEQ ID NO.4所示：

其中，信號肽的堿基序列為：

因此，成熟蛋白酶的編碼序列如SEQ ID NO.5所示：